Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК
- Введение
- RealTime ПЦР
- Виды RealTime ПЦР
- Использование зондов с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons).
- Применение 2-х зондов с резонансным переносом энергии (Fluorescent resonance energy transfer - FRET).
- Использование интеркалирующих агентов.
- Кинетические параметры
- Биологические микрочипы
- ДНК-микрочипы
- Гибридизация-основа технологии
- Применение ДНК-чипов
- Материалы и методы
- Изготовление микропланшетов
- Определение спектра поглощения и эмисии SYBRgreen
- Протоколы полимеразной цепной реакции. Постановка реакции с использованием фирменного набора(система SYBgreen)
- Постановка реакции без использования фирменного набора(система SYBRgreen)
- Протокол полимеразной цепной реакции с использованием TaqMan.
- Электрофоретическое разделение нуклеиновых кислот в 8% ПААГ
- Система детекции результатов анализа
- Результаты и обсуждение. Определение зависимости сигнала флуоресценции от концентрации ДНК
- Проведение ПЦР в разных объемах смеси в пробирках
- Проведение ПЦР реакции в пластиковых микропланшетах
- Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями
- Электрофоретическое разделение нуклеиновых кислот в образцах ПЦР-смеси после амплификации
- Выводы.
- Заключение.
Применение 2-х зондов с резонансным переносом энергии (Fluorescent resonance energy transfer
- FRET).
Данный способ детекции накопления продуктов амплификации отличается повышенной специфичностью, так как увеличение флуоресценции происходит при комплементарном связывании с ампликонами сразу 2-х ДНК зондов [11] (Рис 3). Принцип метода заключается в переносе энергии от одного флуорофора, находящегося на 3` конце первого зонда, ко второму ...
Формирование в цитоплазме полостей и апоптотических
телец
В апоптотической клетке первоначально формируются глубокие впячивания поверхности с образованием полостей, что приводит к фрагментации клетки и формированию окруженных мембраной апоптотических телец, состоящих из цитоплазмы и плотно расположенных органелл, с или без фрагментов ядра.
Фагоцитоз апоптотических клеток или телец
Фагоцитоз ...
Стратегия роющей осы
Самцы большой золотой роющей осы откладывают яйца в подземные норки, куда они перед этим закладывают длиннорогих кузнечиков, служащих пищей для личинок. Джейн Брокман тщательно изучила поведение самок этих ос. Она почти непрерывно проводила записи гнездовой активности 68 индивидуально покрашенных самок на трех различных участках на прот ...