Материалы » Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК » Использование зондов с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons).

Использование зондов с комплементарными концевыми последовательностями (molecular beacons).

Данная методика отличается от описанной выше тем, что концевые последовательности зонда представляют собой взаимно комплементарные области, поэтому при температуре отжига праймеров они схлопываются и образуют шпильки [16](Рис. 2). Внутренняя область зондов содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную амплифицируемой области. При отжиге праймеров зонды, не присоединившиеся к ДНК матрице, остаются в "схлопнутом" состоянии, так что происходит тушение флуоресценции.

Те же зонды, которые отжигаются на матрицу, разворачиваются, и флуоресцентная метка и гаситель расходятся в разные стороны. Таким образом, увеличивается интенсивность свечения. Системы ПЦР в реальном времени, основанные на Использовании зондов с комплементарными концевыми последовательностями, обладают гораздо большей специфичностью чем система TaqMan, и позволяет обнаруживать одиночные замены нуклеотидов в ДНК. [8]


Материалы и методы. Условия культивирования
Штамм LPM-4 стерильно пересевали на скошенные косяки ЭДТА-содержащего агара и выдерживали в термостате 5 суток. Для получения инокулята осуществляли смыв культуры с косяков, засевали в жидкую среду с ЭДТА и культивировали 3-4 суток. После чего инокулят в количестве 10 мл переносили в стерильные 750-мл колбы с 200 мл стерильной жидкой ср ...

Функции почек
Другая важная функция почек состоит в контроле количества воды, солей и минералов в организме. Почти две трети веса тела составляет вода. Половина этой жидкости находится внутри клеток, а остальная часть смешана с естественными солями организма и омывает клетки. Если вокруг клеток слишком много солей, они сморщиваются и уменьшаются. Есл ...

Две стороны единого процесса обмена веществ
Способностью образовывать органические вещества из неорганических обладают лишь зеленые растения и некоторые виды бактерий. Животные и человек используют готовые органические соединения, синтезированные зелеными растениями. В свою очередь, в процессе целого ряда химических преобразований органические соединения в организме животных и че ...