Изготовление микропланшетов
Для эксперимента были изготовлены пластины размером 50х50 мм с рабочей зоной 20х20 мм с различным количеством лунок (до 91 шт). При изготовлении планшетов мы руководствовались размером термокамер в экспериментальном образце амплификотора, поэтому такие их длина и ширина являются оптимальными. Схема амплификатора представлена на рис. 10.
Материал, из которого должны быть изготовлены плашки должен обладать следующими свойствами:
ü термостойкость (материал должен выдерживать минимум 95 С-самая высокая температура в цикле);
ü прочность (не должен подвергаться деформации даже при незначительных механических воздействиях);
ü химическая инертность (материал не должен взаимодействовать с компонентами ПЦР смеси);
ü дешевизна(материал должен быть не дорогим и доступным).
Экспериментально был подобран материал, который обладает всеми вышеперечисленными качествами – это полимерная пленка Aikor DecoDesign Black (производство Германия). Изготовление плашек делали путем термоформовки на металлической матрице с помощью металлического пуансона-позиционера как показано на рис 11. В результате получали планшеты с лунками объем которых бал равен 1,5 мм3.
Хроматография
Хроматографические методы используют для идентификации бактерий и установления их систематического положения. Объекты для исследования — жирные кислоты клеточной стенки, уникальные интермедиаты и конечные метаболиты жизнедеятельности бактерий. Хроматографические системы обычно сопрягают с компьютерами, что значительно упрощает учёт резу ...
Протоколы полимеразной цепной реакции. Постановка
реакции с использованием фирменного набора(система SYBgreen)
Для ПЦР в качестве матрицы использовали плазмиду pcDNA3 cavmut – плазмидный вектор, содержащий кДНК мутантного кавеолина (P132L) человека (исходная концентрация 0,7 мг/мл), пару праймеров pc1(исх.конц. 31 мкМ) и pc2 (исх.конц. 12 мкМ), SYBRgreen (10000 кратный раствор) и taq-полимеразу. Фермент поставляется фирмой Sigma в наборе c буфер ...
Активность основных
карбоксипептидаз у самок мышей при введении
тестостерона и прогестерона
Известно, что тестостерон и прогестерон оказывают влияние на уровень различных пептидных нейрогормонов в организме животных [67, 167, 175, 213, 214, 245, 266, 274], а также на активность некоторых протеолитических ферментов [24, 67, 127, 191] . В связи с этим представляет интерес изучение влияния данных половых стероидов на активность ф ...
