Результаты и обсуждение. Определение зависимости сигнала флуоресценции от концентрации ДНК
Готовили разведение матрицы с концентрациями 7, 3.5, 1.75, 0.875 и 0.219 нг. К растворам ДНК добавляли одинаковое количество красителя SYBRgreen согласно протоколу описанному в пункте 2.3.1. Образцы объемом 1 мкл помещали в лунки планшетов. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа». Результаты измерений представлены в таблице 2 и рис. 16.
Таблица 2
Концентрация ДНК (нг) |
Флуоресцентный сигнал (у.е.) | |
Измерение |
Отклонение | |
7 |
180 |
+/-15 |
3,5 |
170 |
+/-13 |
1,75 |
142 |
+/-11 |
0,875 |
63 |
+/-7 |
0,437 |
41 |
+/-4 |
0,219 |
21 |
+/-2 |
0 |
17 |
+/-2 |
На графике (рис. 16) видно, что зависимость сигнала флуоресценции от концентрации ДНК имеет некую кривую. Разброс значений по мере роста концентрации ДНК увеличивается.
Рис 16
. График зависимости флуоресцентного сигнала от концентрации ДНК.
Использование зондов с комплементарными концевыми последовательностями
(molecular beacons).
Данная методика отличается от описанной выше тем, что концевые последовательности зонда представляют собой взаимно комплементарные области, поэтому при температуре отжига праймеров они схлопываются и образуют шпильки [16](Рис. 2). Внутренняя область зондов содержит нуклеотидную последовательность, комплементарную амплифицируемой области ...
Состав газовой среды
Бактерии чётко разделяют по отношению к содержанию кислорода в атмосфере культивирования.
Аэробы.
Посевы аэробных бактерий культивируют в простых термостатах. Некоторые факультативно анаэробные виды также можно культивировать при атмосферном воздухе, но более оптимально помещение посевов в термостаты с дозированной подачей кислорода ...
Влияние хронического введения физиологического
раствора на активность карбоксипептидазы М в тканях крыс.
Хроническое введение физиологического раствора вызывало повышение активности карбоксипептидазы М во всех исследуемых отделах мозга через 1 и 3 суток после воздействия (рис. 5).
Через сутки после введения наибольшие изменения обнаружены в гиппокампе – в 5,9 раза, в четверохолмии – в 4,7 раза, в стриатуме и больших полушариях – в 3 раза ...