Результаты и обсуждение. Определение зависимости сигнала флуоресценции от концентрации ДНК
Готовили разведение матрицы с концентрациями 7, 3.5, 1.75, 0.875 и 0.219 нг. К растворам ДНК добавляли одинаковое количество красителя SYBRgreen согласно протоколу описанному в пункте 2.3.1. Образцы объемом 1 мкл помещали в лунки планшетов. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа». Результаты измерений представлены в таблице 2 и рис. 16.
Таблица 2
|
Концентрация ДНК (нг) |
Флуоресцентный сигнал (у.е.) | |
|
Измерение |
Отклонение | |
|
7 |
180 |
+/-15 |
|
3,5 |
170 |
+/-13 |
|
1,75 |
142 |
+/-11 |
|
0,875 |
63 |
+/-7 |
|
0,437 |
41 |
+/-4 |
|
0,219 |
21 |
+/-2 |
|
0 |
17 |
+/-2 |
На графике (рис. 16) видно, что зависимость сигнала флуоресценции от концентрации ДНК имеет некую кривую. Разброс значений по мере роста концентрации ДНК увеличивается.
Рис 16
. График зависимости флуоресцентного сигнала от концентрации ДНК.
Метод определения активности
карбоксипептидазы Н
Активность КП Н определяли флюорометрическим методом по Supattapone S., Fricker L.D., Snyder S.H. [262].
Для определения активности фермента смешивали 150 мкл (в случае контрольной пробы) или 140 мкл (в случае опытной пробы) вышеуказанного буфера с 50 мкл гомогената ткани. Опытные пробы содержали 1 мкМ ГЭМЯК. Пробы преинкубировались 8 ...
Взаимосвязь энергетических и
конструктивных процессов в клетке
Взаимосвязь между реакциями, в результате которых энергия выделяется и может быть запасена в клетке, и теми, в которых она затрачивается на построение веществ клетки, удобнее всего рассмотреть на примере метаболизма глюкозы, чаще всего выступающих в качестве «энергодающих» субстратов. При этом нужно иметь в виду два обстоятельства. Перв ...
Влияние факторов среды на устойчивость к наследственно – средовым болезням
Соотношение наследственных и средовых факторов в проявлении этих болезней различно. Неполноценное кормление, высокая и низкая температура, воздействие радиации и т. д. ведут к снижению устойчивости организма к болезням. Нарушение белкового обмена вызывает уменьшение выработки антител. Недостаток витаминов и микроэлементов ослабляет защи ...