Постановка реакции без использования фирменного набора(система SYBRgreen)
В качестве матрицы использовали плазмиду pcDNA3 cavmut (исходная концентрация 0,7 мг/мл), пару праймеров pc1 (исх.конц. 31мкМ) и pc2 (исх.конц. 12 мкМ), SYBRgreen и комплекс фермента (taq-полимераза) с антителами – так называемый Hotstart, 10-кратный сток буфера, растворы dNTP и MgCl2. Связывание полимеразы с антителами нужен для того, чтобы фермент начинал свою работу только при высоких температурах (первая температура каждого цикла реакции – 94оС), а при комнатной оставался неактивным. Общий объем смеси 20 мкл. Амлификации поддавался участок размером около 650 п.н.
Постановка ПЦР:
· 7 нг матрицы,
· 0,2 мкМ pc1,
· 0,2 мкМ pc2,
· деионизированная (milliQ) дистиллированная вода до 14 мкл,
· 2 мкл SYBRgreen,
· 2 мкл буфера (сток х 10),
· 2 мкл 2мМ MgCl2,
· 0,2 мкл taq-полимеразы (5Е/мл),
· 0,4 мкл 0,2мМ dNTP (нуклеотидтрифосфоты).
Для эксперимента использовались микропланшеты собственного изготовления. В качестве контроля служила лунка с ПЦР-ной смесью без матрицы. Для отработки условий ПЦР в микрообъеме проводили 30 циклов. Регистрацию флуоресценции проводили по конечной точке.
Температурный режим (1 цикл):
|
94о С 120 сек |
1 цикл |
|
94о 20 сек |
30 циклов |
|
60о 20 сек | |
|
72 о С 40 сек | |
|
и по окончании нужного количества циклов 72 о С 120 сек | |
Аллергологические методы
Аг многих возбудителей обладают сенсибилизирующим действием, что используют для диагностики инфекционных заболеваний, а также при проведении эпидемиологических исследований. Наибольшее распространение нашли кожно-аллергические пробы, включающие внутрикожное введение Аг (аллергена) с развитием реакции ГЗТ. Кожные пробы нашли применение в ...
Биология белки обыкновенной
Систематика
Царство – животные (Regnum Zoo)
Подцарство – млекопитающие (Subregnum metazoo)
Тип – хордовые (Philum chordata)
Подтип – позвоночные (Subphilum vertebrata)
Класс – млекопитающие (Classis mammalia)
Подкласс – плацентарные (Subclassis eutcheria)
Отряд – грызуны (Ordo rodentia)
Семейство – беличьи (Familia sciuridae)
Р ...
Мужские половые органы
К мужским половым органам относятся: яички с их оболочками, семявыносящие протоки с семенными пузырьками, предстательная железа, бульбоуретральные (куперовы) железы - внутренние половые органы; половой член и мошонка - наружные половые органы.
Яички (testes) расположены в мошонке и представляют собой овальные тела, несколько сплющенные ...