Применение 2-х зондов с резонансным переносом энергии (Fluorescent resonance energy transfer - FRET).
Данный способ детекции накопления продуктов амплификации отличается повышенной специфичностью, так как увеличение флуоресценции происходит при комплементарном связывании с ампликонами сразу 2-х ДНК зондов [11] (Рис 3). Принцип метода заключается в переносе энергии от одного флуорофора, находящегося на 3` конце первого зонда, ко второму флуорофору, находящемуся на 5` конце второго зонда, причем расстояние между флуорофорами составляет 1-3 нуклеотида.
Рис. 3.
Схема ПЦР в реальном времени с использованием зондов FRET [7].
При одновременном связывании обоих зондов с ДНК матрицей испускаемое первым флуорофором излучение передается на второй флуорофор, а его излучение детектируется прибором. Таким образом, возрастает специфичность анализа.
Список сокращений
АКТГ – адренокортикотропный гормон
ГПЯК – гуанидинопропилянтарная кислота
ГЭМЯК – гуанидиноэтилмеркаптоянтарная кислота
ДОФА - диоксифенилаланин
КОМТ - катехолортометилтрансфераза
КПА – карбоксипептидаза А
КПВ – карбоксипептидаза В
КПН – карбоксипептидаза Н
КПM – карбоксипептидаза M
КПN – карбоксипептидаза N
ЛКПВ – лизосомальн ...
Протокол полимеразной цепной реакции с использованием TaqMan.
На одну пробу объемом 20 мкл смешивают:
· 8,75 мкл смеси А,
· 8,75 мкл смеси Б,
· 0,2 мкл Taq-полимеразы,
· 2 мкл ДНК.
95о С 5 мин
1 цикл
95о С 20 сек
40 циклов
62о С 20 сек
72 о С 40 сек
и по окончании нужного количества циклов
72 о С 40 сек ...
Птолемеевская
система мира
Попытка решения трудностей в модели Аристотеля была предпринята выдающимся александрийским ученым Клавдием Птолемеем. Клавдий Птолемей (90–168 г.г. н. э.) – выдающийся греко-египетский астроном, астролог, математик, географ и оптик, вероятно, родом из Птолемиады в Среднем Египте. В своей работе “Великое построение”, известной под своим ...