Материалы » Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК » Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями

Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями

ПЦР ставили по протоколам с использованием SYBRgreen и TaqMan. Общий объем ПЦР смеси составлял 1 мкл. Количество внесенной матрицы одинаково – 7 нг. Контролем служили пробы без матрицы. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа». Результаты измерений представлены в таблице 5.

По данным таблицы видно, что приращение сигнала флуоресценции сопоставимо с измерениями, полученными при проведении ПЦР в капле смеси объемом 1 мкл в среде масла в обоих случаях. А значит амплификация проходит с не меньшей эффективностью чем на моделях с каплями. Сильный разброс значений в случае SYBRgreen лишний раз доказывает, что работа с микрообъемами – это очень сложный процесс, где даже самые минимальные погрешности в работе (погрешности пипеток, чистота преперата и т.д.) становятся критичными и влияют на результат.

Таблица 5.

SYBRgreen

С матрицей

(флуоресценция, у.е.)

Среднее значение (среднее отклонение)

Без матрицы

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Приращение

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение(среднее отклонение)

41

40,8(3)

34

35,4(4)

7

5,4(3,5)

40

31

9

38

36

2

44

39

5

41

37

4

TaqMan

С матрицей

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Без матрицы

(флуоресценция,у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Приращение

(флуоресценция,у.е)

Среднее значение(среднее отклонение)

82

89,2(8,5)

57

58,2(1,5)

25

31(19)

99

55

44

91

60

31

89

60

29

85

59

26


Обнаружение, количественное определение и характеристика макромолекул после электрофореза
На электрофоретически разделенные антигены наносят иммунные сыворотки, содержащие различные специфические антитела. При встрече соответствующих антигена и антитела в зоне оптимального их соотношения наблюдается реакция преципитации невооруженным глазом. Иммунный электрофорез объединяет преимущества электрофореза и иммунной реакции: высо ...

Взаимодействия белков с рРНК
Взаимодействия белков с рРНК очень сильно отличаются от взаимодействий белков с ДНК и тРНК. Места связывания белков на ДНК и тРНК характерны наличием специфической эволюционно консервативной последовательности нуклеотидов, замена которых приводит к сильному ослаблению или исчезновению взаимодействий [1]. Предположение об определяющей ро ...

Научная революция XVIII–XIX веков. Диалектизация естествознания
Суть научной революции второй половины XVIII–XIX веков заключалась в процессе стихийной диалектизации естествознания (метафизический метод, при котором объекты и явления рассматривались без взаимосвязи с другими и считались неизменимыми во времени, сменился диалектическим). Диалектика предполагает изучение объектов, явлений со всем бог ...