Материалы » Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК » Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями

Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями

ПЦР ставили по протоколам с использованием SYBRgreen и TaqMan. Общий объем ПЦР смеси составлял 1 мкл. Количество внесенной матрицы одинаково – 7 нг. Контролем служили пробы без матрицы. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа». Результаты измерений представлены в таблице 5.

По данным таблицы видно, что приращение сигнала флуоресценции сопоставимо с измерениями, полученными при проведении ПЦР в капле смеси объемом 1 мкл в среде масла в обоих случаях. А значит амплификация проходит с не меньшей эффективностью чем на моделях с каплями. Сильный разброс значений в случае SYBRgreen лишний раз доказывает, что работа с микрообъемами – это очень сложный процесс, где даже самые минимальные погрешности в работе (погрешности пипеток, чистота преперата и т.д.) становятся критичными и влияют на результат.

Таблица 5.

SYBRgreen

С матрицей

(флуоресценция, у.е.)

Среднее значение (среднее отклонение)

Без матрицы

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Приращение

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение(среднее отклонение)

41

40,8(3)

34

35,4(4)

7

5,4(3,5)

40

31

9

38

36

2

44

39

5

41

37

4

TaqMan

С матрицей

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Без матрицы

(флуоресценция,у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Приращение

(флуоресценция,у.е)

Среднее значение(среднее отклонение)

82

89,2(8,5)

57

58,2(1,5)

25

31(19)

99

55

44

91

60

31

89

60

29

85

59

26


Активность ФМСФ-ингибируемой КП в тканях крыс при введении диазепама. Влияние однократного введения диазепама на активность ФМСФ-ингибируемой КП в тканях крыс.
Введение диазепама вызывало достоверные изменения активности ФМСФ-ингибируемой КП во всех изученных тканях (рис. 3). В гипофизе через 4 и 72 часа активность фермента была ниже на 24 и 49% соответственно, чем у контроля. Через 24 и 72 часа в гипоталамусе наблюдалось снижение активности ФМСФ-ингибируемой КП на 32 и 55% относительно соотве ...

Активность и поведение маньчжурского зайца.
Маньчжурские зайцы наиболее активны после наступления темноты и перед рассветом. Кормятся они ночью. На открытые места зайцы не выходят, а передвигаются в зарослях травы и кустарников, где у них проложены тропы и «лазы». Обычно ночной маршрут зайца не превышает 0,5 км, а максимальное расстояние, на которое уходит заяц, передвигаясь от о ...

Метод определения активности карбоксипептидазы Н
Активность КП Н определяли флюорометрическим методом по Supattapone S., Fricker L.D., Snyder S.H. [262]. Для определения активности фермента смешивали 150 мкл (в случае контрольной пробы) или 140 мкл (в случае опытной пробы) вышеуказанного буфера с 50 мкл гомогената ткани. Опытные пробы содержали 1 мкМ ГЭМЯК. Пробы преинкубировались 8 ...