Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями
ПЦР ставили по протоколам с использованием SYBRgreen и TaqMan. Общий объем ПЦР смеси составлял 1 мкл. Количество внесенной матрицы одинаково – 7 нг. Контролем служили пробы без матрицы. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа». Результаты измерений представлены в таблице 5.
По данным таблицы видно, что приращение сигнала флуоресценции сопоставимо с измерениями, полученными при проведении ПЦР в капле смеси объемом 1 мкл в среде масла в обоих случаях. А значит амплификация проходит с не меньшей эффективностью чем на моделях с каплями. Сильный разброс значений в случае SYBRgreen лишний раз доказывает, что работа с микрообъемами – это очень сложный процесс, где даже самые минимальные погрешности в работе (погрешности пипеток, чистота преперата и т.д.) становятся критичными и влияют на результат.
Таблица 5.
|
SYBRgreen | |||||||||
|
С матрицей (флуоресценция, у.е.) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Без матрицы (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Приращение (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение(среднее отклонение) | ||||
|
41 |
40,8(3) |
34 |
35,4(4) |
7 |
5,4(3,5) | ||||
|
40 |
31 |
9 | |||||||
|
38 |
36 |
2 | |||||||
|
44 |
39 |
5 | |||||||
|
41 |
37 |
4 | |||||||
|
TaqMan | |||||||||
|
С матрицей (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Без матрицы (флуоресценция,у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Приращение (флуоресценция,у.е) |
Среднее значение(среднее отклонение) | ||||
|
82 |
89,2(8,5) |
57 |
58,2(1,5) |
25 |
31(19) | ||||
|
99 |
55 |
44 | |||||||
|
91 |
60 |
31 | |||||||
|
89 |
60 |
29 | |||||||
|
85 |
59 |
26 | |||||||
Принципы возрастания энергии. Элементы квантовой физики. Энергия, энтропия.
I и II начала термодинамики
В XIX веке появилось понятие «энергия» – единая мера различных форм движения материи. Всеми явлениями природы управляет закон сохранения и превращения энергии: энергия в природе не возникает из ничего и не исчезает бесследно: количество энергии неизменно, она только переходит из одной формы в другую. Этот универсальный закон называется ...
Каталитические системы дыхания
Окисление дыхательных субстратов в ходе дыхания осуществляется с участием ферментов. Ферменты как белковые катализаторы, помимо свойств, присущих неорганическим катализаторам, обладают рядом особенностей: высокой активностью, высокой специфичностью по отношению к субстратам и высокой лабильностью. Их пространственная организации зависящ ...
Шишковидное тело
Шишковидное тело (corpus pineale), или эпофиз мозга — непарный орган массой 0,2 — 0,4 г, относится к эпиталамической области промежуточного мозга и располагается в неглубокой борозде, отделяющей друг от друга верхние холмики крыши среднего мозга. От переднего конца шишковидного тела к медиальной поверхности правого и левого зрительных б ...