Материалы » Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК » Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями

Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями

ПЦР ставили по протоколам с использованием SYBRgreen и TaqMan. Общий объем ПЦР смеси составлял 1 мкл. Количество внесенной матрицы одинаково – 7 нг. Контролем служили пробы без матрицы. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа». Результаты измерений представлены в таблице 5.

По данным таблицы видно, что приращение сигнала флуоресценции сопоставимо с измерениями, полученными при проведении ПЦР в капле смеси объемом 1 мкл в среде масла в обоих случаях. А значит амплификация проходит с не меньшей эффективностью чем на моделях с каплями. Сильный разброс значений в случае SYBRgreen лишний раз доказывает, что работа с микрообъемами – это очень сложный процесс, где даже самые минимальные погрешности в работе (погрешности пипеток, чистота преперата и т.д.) становятся критичными и влияют на результат.

Таблица 5.

SYBRgreen

С матрицей

(флуоресценция, у.е.)

Среднее значение (среднее отклонение)

Без матрицы

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Приращение

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение(среднее отклонение)

41

40,8(3)

34

35,4(4)

7

5,4(3,5)

40

31

9

38

36

2

44

39

5

41

37

4

TaqMan

С матрицей

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Без матрицы

(флуоресценция,у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Приращение

(флуоресценция,у.е)

Среднее значение(среднее отклонение)

82

89,2(8,5)

57

58,2(1,5)

25

31(19)

99

55

44

91

60

31

89

60

29

85

59

26


Биометрическая обработка качественных выборок (х, σ, rg, дисперсионный анализ)
С помощью дисперсионного анализа можно установить достоверность и силу влияния, а также относительную роль одного или нескольких факторов в общей изменчивости признака. х = ∑V/N ·100; σ² = (∑V² - H) / (n-1). V – сумма вариантов; n – число вариантов; Н – поправка. ...

Женские половые органы
Женские половые органы подразделяются на внутренние и наружные. К внутренним относятся яичники, маточные трубы, или яйцеводы, матка и влагалище. Они расположены в полости малого таза. Наружные половые органы в совокупности составляют женскую половую область и представлены большими и малыми половыми губами, клитором, девственной плевой и ...

Наследование признаков, сцепленных с полом
Признаки, гены которых наход-ся в половых хром-мах, наз-ся сцепленные с полом. В у - хром-ме генов. почти нет, поэтому если говорят, что признак сцеплен с полом, значит ген наход-ся в х - хром-ме. Если ген расположен в у - хром-ме, то это обычно оговаривается. У чел-ка известно около 300 генов, находящ-ся в х - хром-ме и вызывающих насл ...