Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями
ПЦР ставили по протоколам с использованием SYBRgreen и TaqMan. Общий объем ПЦР смеси составлял 1 мкл. Количество внесенной матрицы одинаково – 7 нг. Контролем служили пробы без матрицы. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа». Результаты измерений представлены в таблице 5.
По данным таблицы видно, что приращение сигнала флуоресценции сопоставимо с измерениями, полученными при проведении ПЦР в капле смеси объемом 1 мкл в среде масла в обоих случаях. А значит амплификация проходит с не меньшей эффективностью чем на моделях с каплями. Сильный разброс значений в случае SYBRgreen лишний раз доказывает, что работа с микрообъемами – это очень сложный процесс, где даже самые минимальные погрешности в работе (погрешности пипеток, чистота преперата и т.д.) становятся критичными и влияют на результат.
Таблица 5.
|
SYBRgreen | |||||||||
|
С матрицей (флуоресценция, у.е.) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Без матрицы (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Приращение (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение(среднее отклонение) | ||||
|
41 |
40,8(3) |
34 |
35,4(4) |
7 |
5,4(3,5) | ||||
|
40 |
31 |
9 | |||||||
|
38 |
36 |
2 | |||||||
|
44 |
39 |
5 | |||||||
|
41 |
37 |
4 | |||||||
|
TaqMan | |||||||||
|
С матрицей (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Без матрицы (флуоресценция,у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Приращение (флуоресценция,у.е) |
Среднее значение(среднее отклонение) | ||||
|
82 |
89,2(8,5) |
57 |
58,2(1,5) |
25 |
31(19) | ||||
|
99 |
55 |
44 | |||||||
|
91 |
60 |
31 | |||||||
|
89 |
60 |
29 | |||||||
|
85 |
59 |
26 | |||||||
Биосфера и человек
Современный человек сформировался около 30-40 тыс. лет назад. С этого времени в эволюции биосферы стал действовать новый фактор –антропогенный. Первая созданная человеком культура – палеолит (каменный век)продолжалась примерно 20-30- тыс. лет; она совпала с длительным период омоледенения. Экономической основой жизни человеческого общест ...
Активность
карбоксипептидазы М в тканях крыс при введении галоперидола. Влияние однократного введения
галоперидола на активность карбоксипептидазы М в тканях крыс.
Введение галоперидола увеличивало активность КП М в гипоталамусе через 4 часа после воздействия на 97%, через 24 часа на 51% относительно контрольной группы (рис. 6). В четверохолмии и гиппокампе активность через 4 часа была выше, чем у контроля, на 97 и 86% соответственно. Увеличение активности фермента в 2,3 раза по сравнению с контро ...
Биометрическая обработка малых выборок ((X+- m)x, Cv, t)
(x
= ∑V/n), (σ
= √ C/ (n-1)), (C
= ∑V²-(∑V)²/n), (C
1
= (σ / x)·100%), (m
= σ/√n), (x +- m), (t
= x/m). x
- средняя арифметическая величина признака. σ
–
среднее квадратичное отклонение.
Cv
-
коэффициент вариации.
m
– ошибка средней арифметической. t
–
критерий достовер ...