Материалы » Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК » Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями

Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями

ПЦР ставили по протоколам с использованием SYBRgreen и TaqMan. Общий объем ПЦР смеси составлял 1 мкл. Количество внесенной матрицы одинаково – 7 нг. Контролем служили пробы без матрицы. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа». Результаты измерений представлены в таблице 5.

По данным таблицы видно, что приращение сигнала флуоресценции сопоставимо с измерениями, полученными при проведении ПЦР в капле смеси объемом 1 мкл в среде масла в обоих случаях. А значит амплификация проходит с не меньшей эффективностью чем на моделях с каплями. Сильный разброс значений в случае SYBRgreen лишний раз доказывает, что работа с микрообъемами – это очень сложный процесс, где даже самые минимальные погрешности в работе (погрешности пипеток, чистота преперата и т.д.) становятся критичными и влияют на результат.

Таблица 5.

SYBRgreen

С матрицей

(флуоресценция, у.е.)

Среднее значение (среднее отклонение)

Без матрицы

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Приращение

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение(среднее отклонение)

41

40,8(3)

34

35,4(4)

7

5,4(3,5)

40

31

9

38

36

2

44

39

5

41

37

4

TaqMan

С матрицей

(флуоресценция, у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Без матрицы

(флуоресценция,у.е)

Среднее значение (среднее отклонение)

Приращение

(флуоресценция,у.е)

Среднее значение(среднее отклонение)

82

89,2(8,5)

57

58,2(1,5)

25

31(19)

99

55

44

91

60

31

89

60

29

85

59

26


Поверхность животной клетки
Прежде чем переходить к обсуждению структур различных мембраносвязанных рецепторов и механизмов индукции клеточного ответа, полезно рассмотреть строение поверхности животной клетки, поскольку большинство исследований в этой области выполнено на клетках животных. Плазматическую мембрану отличают от других клеточных мембран две особенност ...

Бессознательное и сознательное в человеке.
Одной из величайших загадок, над разгадкой которой уже не одно столетие трудятся учёные мужи всего мира, является тайна человеческого разума. Этого прекрасного дара, которым обладает человек и благодаря которому он владеет полётом в мир мечты и фантазии, в прошлое и в грядущее, благодаря которому он достиг столь высокого уровня развития ...

Строение и функции органоидов клетки
Органоиды – специфические дифференцируемые структуры клетки, выполняющие определённые функции. Э.П.С.состоит из канальцев, узких щелевидных полостей, расширенных полостей, отдельных пузырьков и мешочков. 2 типа Э.П.С.: агранулярная, гранулярная. Агранулярная представлена только мембранным комплексом, она участвует в синтезе углеводов и ...