Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями
ПЦР ставили по протоколам с использованием SYBRgreen и TaqMan. Общий объем ПЦР смеси составлял 1 мкл. Количество внесенной матрицы одинаково – 7 нг. Контролем служили пробы без матрицы. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа». Результаты измерений представлены в таблице 5.
По данным таблицы видно, что приращение сигнала флуоресценции сопоставимо с измерениями, полученными при проведении ПЦР в капле смеси объемом 1 мкл в среде масла в обоих случаях. А значит амплификация проходит с не меньшей эффективностью чем на моделях с каплями. Сильный разброс значений в случае SYBRgreen лишний раз доказывает, что работа с микрообъемами – это очень сложный процесс, где даже самые минимальные погрешности в работе (погрешности пипеток, чистота преперата и т.д.) становятся критичными и влияют на результат.
Таблица 5.
|
SYBRgreen | |||||||||
|
С матрицей (флуоресценция, у.е.) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Без матрицы (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Приращение (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение(среднее отклонение) | ||||
|
41 |
40,8(3) |
34 |
35,4(4) |
7 |
5,4(3,5) | ||||
|
40 |
31 |
9 | |||||||
|
38 |
36 |
2 | |||||||
|
44 |
39 |
5 | |||||||
|
41 |
37 |
4 | |||||||
|
TaqMan | |||||||||
|
С матрицей (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Без матрицы (флуоресценция,у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Приращение (флуоресценция,у.е) |
Среднее значение(среднее отклонение) | ||||
|
82 |
89,2(8,5) |
57 |
58,2(1,5) |
25 |
31(19) | ||||
|
99 |
55 |
44 | |||||||
|
91 |
60 |
31 | |||||||
|
89 |
60 |
29 | |||||||
|
85 |
59 |
26 | |||||||
Пищеварение в желудке
Многочисленные железы слизистой оболочки желудка вырабатывают желудочный сок. Основным ферментом его является пепсин, расщепляющий сложные молекулы белка на более простые молекулы аминокислот. Пищеварение в желудке происходит только при температуре тела 35—37 °С и при наличии в желудочном соке соляной кислоты, повышающей активность ферм ...
Ранние представления об РНК-белковых
взаимодействиях. РНК-связывающие
структурные мотивы в белках
Изучение свойств РНК-связывающих белков привело к обнаружению в этих белках ряда и консервативных мотивов. Их открытие позволило начать классификацию РНК-связывающих белков, исходя из их структурных особенностей, а также предсказывать РНК-связывающие свойства белков [8]. В настоящее время выделяют следующие основные мотивы:
1) РНП (rib ...
Активность
карбоксипептидазы М в тканях крыс в норме и при введении психолептиков. Распределение активности карбоксипептидазы М в тканях
интактных животных
Данные о распределении активности КП М в тканях самцов крыс представлены в таблице 9.
Таблица 9. Активность КП М у интактных животных (нмоль продукта, образовавшегося за 1 мин инкубации на 1 мг белка, М ± m, n = 7-8)
Отделы мозга, органы
КП М M±m
Гипоталамус
0,08±0,005
Четверохолмие
0,11±0,007
Мозжечок
0, ...