Протоколы полимеразной цепной реакции. Постановка реакции с использованием фирменного набора(система SYBgreen)
Для ПЦР в качестве матрицы использовали плазмиду pcDNA3 cavmut – плазмидный вектор, содержащий кДНК мутантного кавеолина (P132L) человека (исходная концентрация 0,7 мг/мл), пару праймеров pc1(исх.конц. 31 мкМ) и pc2 (исх.конц. 12 мкМ), SYBRgreen (10000 кратный раствор) и taq-полимеразу. Фермент поставляется фирмой Sigma в наборе c буфером в лиофильном состоянии в комплекте с растворителем. Кит рассчитан на общий объем смеси 20 мкл. Амлифицировался участок (фрагмент) размером около 650 п.н.
Постановка ПЦР:
· 7 нг матрицы,
· 0,2мкМ pc1,
· 0,2мкМ pc2,
· деионизированная (milliQ) дистиллированная вода до 10 мкл,
· 10мкл растворителя,
· 0,2мкл SYBRgreen (разведенного в 100 раз).
Для эксперимента использовались микропланшеты собственного изготовления. В качестве контроля служила лунка с ПЦР-ной смесью без матрицы. Для отработки условий ПЦР в микрообъеме проводили 30 циклов. Регистрацию флуоресценции проводили по конечной точке. Температурный режим (1 цикл):
|
94о С 120 сек |
1 цикл |
|
94о 20 сек |
30 циклов |
|
60о 20 сек | |
|
72 о С 40 сек | |
|
и по окончании нужного количества циклов 72 о С 120 сек | |
Назовите все те процессы жизнедеятельности клеток, тканей, организмов,
которые осуществляются на основе митоза. Сделайте вывод о роли митоза
Митоз - сложное деление ядра клетки, биологическое значение которого заключается в точном идентичном распределении генетической информации между ядрами дочерних клеток.
Таким образом, на уровне клетки на основе митоза происходит равномерное распределение хромосом, а вместе с хромосомами и наследственной информации.
На уровне клетки пр ...
Сводные биохимические показатели метаболизма собак и кошек. Показатели
углеводного обмена
Клиническое значение.
Повышенное содержание глюкозы в крови (гипергликемия), особенно при повторных исследованиях, чаще всего указывает на наличие сахарного диабета. По данным американских авторов (1.1. Kaneko, 1980), это заболевание у кошек и собак встречается чаще, чем у других животных (1:152 у собак и 1:800 у кошек). На частоту заб ...
Две стороны единого процесса обмена веществ
Способностью образовывать органические вещества из неорганических обладают лишь зеленые растения и некоторые виды бактерий. Животные и человек используют готовые органические соединения, синтезированные зелеными растениями. В свою очередь, в процессе целого ряда химических преобразований органические соединения в организме животных и че ...