Протоколы полимеразной цепной реакции. Постановка реакции с использованием фирменного набора(система SYBgreen)
Для ПЦР в качестве матрицы использовали плазмиду pcDNA3 cavmut – плазмидный вектор, содержащий кДНК мутантного кавеолина (P132L) человека (исходная концентрация 0,7 мг/мл), пару праймеров pc1(исх.конц. 31 мкМ) и pc2 (исх.конц. 12 мкМ), SYBRgreen (10000 кратный раствор) и taq-полимеразу. Фермент поставляется фирмой Sigma в наборе c буфером в лиофильном состоянии в комплекте с растворителем. Кит рассчитан на общий объем смеси 20 мкл. Амлифицировался участок (фрагмент) размером около 650 п.н.
Постановка ПЦР:
· 7 нг матрицы,
· 0,2мкМ pc1,
· 0,2мкМ pc2,
· деионизированная (milliQ) дистиллированная вода до 10 мкл,
· 10мкл растворителя,
· 0,2мкл SYBRgreen (разведенного в 100 раз).
Для эксперимента использовались микропланшеты собственного изготовления. В качестве контроля служила лунка с ПЦР-ной смесью без матрицы. Для отработки условий ПЦР в микрообъеме проводили 30 циклов. Регистрацию флуоресценции проводили по конечной точке. Температурный режим (1 цикл):
|
94о С 120 сек |
1 цикл |
|
94о 20 сек |
30 циклов |
|
60о 20 сек | |
|
72 о С 40 сек | |
|
и по окончании нужного количества циклов 72 о С 120 сек | |
Размножение маньчжурского зайца.
Размножение маньчжурского зайца почти не изучено. Начало его гона зарегистрировано в начале февраля. Во второй половине февраля и в марте наблюдалась кровавая моча на снегу. В 1970 г. в верховьях реки Борисовка гон у этих зайцев отмечался с последних чисел февраля до 20 марта. Характерным признаком начала гона, кроме появления кровавой ...
Биогенные вещества и удобрения
Общее производство удобрений – 80 млн. тонн в год. Их производство возрастает, т. к. увеличить площадь сельскохозяйственных земель нельзя, поэтому нужно повышать плодородие почвы.
Наиболее опасны азотные удобрения, т. к. их избыток приводит к накоплению нитратов и нитритов. Они приводят к снижению общего иммунитета и повреждениям мочеп ...
Белки крови
Клиническое значение:
Повышенное содержание общего белка сыворотки крови (гиперпротеинемия) наблюдается или при повышенном синтезе белка, преимущественно глобулинов, или при потере жидкости организмом. Повышенный синтез наблюдается при макроглобулинемии, хронических воспалениях, например при хроническом полиартрите, у кошек при перитон ...