BioNow

Принцип метода полимеразной цепной реакции был разработан Кэри Мюллисом в 1983 г. Первые сообщения по практическому применению метода появились в 1985 г.[18] С тех пор количество публикаций, где ПЦР используется в качестве одного из методов исследования, занимает одно из первых мест наряду с работами, в которых применяются автоматическое определение нуклеотидной последовательности (сиквенирование ДНК) и гибридизационные технологии.[7]Существует большое количество способов получить данные о концентрации нуклеиновых кислот в пробе методом ПЦР, но все они требуют дополнительных трудоемких этапов работы, связанных с предварительной раститровкой выделенной из анализируемой пробы ДНК, или полученных в ходе ПЦР ампликонов, что приводит к увеличению времени, необходимого для постановки анализа и сложности интерпретации полученных результатов [12,15]. Также, наличие дополнительных этапов работы увеличивает вероятность ошибки и получения недостоверного результата.

На сегодня существует метод, лишенный вышеперечисленных недостатков - это метод ПЦР в реальном времени (Real-Time PCR) [14]. Сущность метода заключается в исследовании накопления продуктов амплификации с помощью специального прибора без последующего электрофореза. Так как кинетика накопления продуктов амплификации связана с исходным количеством матрицы, это дает возможность точно оценить её количество [13].

Отличительными чертами данного метода, в отличие от классической ПЦР, является возможность количественного определения ДНК/РНК инфекционных агентов в исследуемом материале, отсутствие стадии электрофореза, менее строгие требования к организации ПЦР-лаборатории и автоматическая регистрация и интерпретация полученных результатов.

Отсутствие стадии электрофореза позволяет минимизировать риск контаминации продуктами ПЦР и таким образом резко уменьшить число ложноположительных результатов. Поскольку регистрация результатов проводится непосредственно в процессе ПЦР, весь анализ можно проводить в одной-двух комнатах лаборатории и нет необходимости в отдельном помещении для детекции продуктов реакции.

Использование математических методов анализа позволяет проводить автоматическую интерпретацию полученных результатов и снимает проблему субъективной оценки электрофореграмм.

Экспериментальная часть
Выделение почвенных дрожжей производилось чашечным методом, путем высева на различные питательные среды. Рецепт среды см. в приложении. Проба №1 – почва с полевая (не посевная). Проба №2 – почва лесная. Проба №3 – почва садовая (парк АГТУ). Проба №4 – почва с луговая (заливная). Проба №5 – почва из грибницы шампиньона. При исследо ...

Годовой план применения видов удобрений, расчет общей потребности в органических и минеральных удобрениях, площади склада минеральных удобрений
Годовой план применения удобрений предполагает расчет физической массы удобрений для каждого поля в отдельности и в целом по всему севообороту. В ОАО "Надежда" используют следующие виды удобрений: из азотных – аммиачную селитру и карбамид, из фосфорных – суперфосфат двойной и простой, из калийных – хлористый калий. Расчет пров ...

Выводы:
1. Получен и обработан набор дифракционных данных для комплекса S15-16SрРНК (S15 T3C мутант). 2. Методом молекулярного замещения определена структура комплекса. 3. Показано, что рибосомный белок комплекса S15 связывается с 16S рРНК в двух пространственно удалённых участках. 4. Показано, что мутация Т3С не изменяет пространственной ст ...