Материалы » Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК » Проведение ПЦР реакции в пластиковых микропланшетах

Проведение ПЦР реакции в пластиковых микропланшетах

ПЦР проводили по вышеописанному протоколу (используя кит) на планшете с 25 лунками. ПЦР смесь добавляли в лунки объемом 1 мкл. Использовалось 2 вида контрольных проб. Первый контроль – это пцр смесь без матрицы. Второй контроль – это водный раствор SYBRgreen той же концентрации что и в пцр смеси. Схема эксперимента представлена на рис. 19. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа».

Рис. 19.

Схема нанесения проб в лунки планшета.

Рис. 20.

Результат амплификации в пластиковых микропланшетах.

По результатам эксперимента (рис. 20) видно что в 1 и 3 ряду амплификация прошла, так как интенсивность флуоресценции заметно возросла. Темное пятнышко по центру лунок – это некоторый объем воздуха который образуется при покрытии плашки пленкой. Это указывает на то, что практически весь объем лунки заполнен образцом.

В этих же рядах в лунках под номером 5 сигнал значения не изменил. Это доказывает то, что матрица здесь не присутствовала. Контроль номер 2 также сработал, так как флуоресценция в 4 ряду свое значение не изменила. Второй и пятый ряды практически не флуоресцируют. Это подтверждает наличие в их лунках воды. Значения сигнала флуоресценции каждой лунки представлены в таблице 4. Графическое изображение полученной картины представлено на рис. 21.

1 столбец

2 столбец

3 столбец

4 столбец

5 столбец

1 ряд

49,82

73,54

84,25

83,68

38,91

2 ряд

17,61

35,76

34,41

31,66

24,56

3 ряд

72,26

92,30

117,95

113,88

41,02

4 ряд

26,88

34,04

40,36

43,36

40,88

5 ряд

10,34

12,81

17,81

20,89

19,08

Таблица 4

Рис. 21.

Диаграмма, отображающая уровень сигнала в лунках пластиковой микроплашки.


Безопасность на производстве. Общие вопросы охраны труда
Охрана труда – это система обеспечения безопасности жизни и здоровья работников в процессе трудовой деятельности, включающая правовые, социально-экономические, организационно-технические, санитарно-гигиенические, лечебно-профилактические, реабилитационные и иные мероприятия. (Хван Т.А., 2000) Законодательство РФ об охране труда состоит ...

Строение и функции органоидов клетки
Органоиды – специфические дифференцируемые структуры клетки, выполняющие определённые функции. Э.П.С.состоит из канальцев, узких щелевидных полостей, расширенных полостей, отдельных пузырьков и мешочков. 2 типа Э.П.С.: агранулярная, гранулярная. Агранулярная представлена только мембранным комплексом, она участвует в синтезе углеводов и ...

Предмет, метод и задачи гидробиологии
В настоящее время гидробиологию наиболее принято рассматривать как науку, изучающую жизнь в гидросфере в экологическом плане. Выделение гидробиологии в самостоятельную дисциплину обусловлено особенностями водной среды, накладывающей характерный отпечаток на жизнь ее обитателей, а также необходимостью применения в отношении водного насел ...