Проведение ПЦР реакции в пластиковых микропланшетах
ПЦР проводили по вышеописанному протоколу (используя кит) на планшете с 25 лунками. ПЦР смесь добавляли в лунки объемом 1 мкл. Использовалось 2 вида контрольных проб. Первый контроль – это пцр смесь без матрицы. Второй контроль – это водный раствор SYBRgreen той же концентрации что и в пцр смеси. Схема эксперимента представлена на рис. 19. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа».
Рис. 19.
Схема нанесения проб в лунки планшета.
Рис. 20.
Результат амплификации в пластиковых микропланшетах.
По результатам эксперимента (рис. 20) видно что в 1 и 3 ряду амплификация прошла, так как интенсивность флуоресценции заметно возросла. Темное пятнышко по центру лунок – это некоторый объем воздуха который образуется при покрытии плашки пленкой. Это указывает на то, что практически весь объем лунки заполнен образцом.
В этих же рядах в лунках под номером 5 сигнал значения не изменил. Это доказывает то, что матрица здесь не присутствовала. Контроль номер 2 также сработал, так как флуоресценция в 4 ряду свое значение не изменила. Второй и пятый ряды практически не флуоресцируют. Это подтверждает наличие в их лунках воды. Значения сигнала флуоресценции каждой лунки представлены в таблице 4. Графическое изображение полученной картины представлено на рис. 21.
|
1 столбец |
2 столбец |
3 столбец |
4 столбец |
5 столбец | |
|
1 ряд |
49,82 |
73,54 |
84,25 |
83,68 |
38,91 |
|
2 ряд |
17,61 |
35,76 |
34,41 |
31,66 |
24,56 |
|
3 ряд |
72,26 |
92,30 |
117,95 |
113,88 |
41,02 |
|
4 ряд |
26,88 |
34,04 |
40,36 |
43,36 |
40,88 |
|
5 ряд |
10,34 |
12,81 |
17,81 |
20,89 |
19,08 |
Таблица 4
Рис. 21.
Диаграмма, отображающая уровень сигнала в лунках пластиковой микроплашки.
Обсуждение результатов
В практике спорта большое значение имеет жесткий контроль за параметрами кислотно-основного равновесия крови. Нарушения КОС ведут к значительным изменениям во всех видах обмена веществ. Физическая работа, особенно анаэробного характера, всегда сопровождается нарастанием кислородного дефицита в организме. В таких условиях большое значени ...
Показатели белкового обмена
Клиническое значение. Билирубин является нормальным продуктом распада гемоглобина. Этот процесс начинается в селезенке, где образуются биливердин и непрямой билирубин. Они поступают в кровь и далее - в печень, где превращаются в прямой билирубин. В составе желчи, окрашенной именно желчными пигментами, билирубин поступает в кишечник, где ...
Механизмы действия эйкозаноидов, основные
биологические эффекты
Эйкозаноиды - гормоны местного действия по ряду признаков:
образуются в различных тканях и органах, а не только в эндокринных железах;
действуют по аутокринному или паракринному механизмам;
концентрация эйкозаноидов в крови меньше, чем необходимо, чтобы вызвать ответ в клетках-мишенях.
Вариабельность картины действия различных прост ...