Материалы » Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК » Проведение ПЦР реакции в пластиковых микропланшетах

Проведение ПЦР реакции в пластиковых микропланшетах

ПЦР проводили по вышеописанному протоколу (используя кит) на планшете с 25 лунками. ПЦР смесь добавляли в лунки объемом 1 мкл. Использовалось 2 вида контрольных проб. Первый контроль – это пцр смесь без матрицы. Второй контроль – это водный раствор SYBRgreen той же концентрации что и в пцр смеси. Схема эксперимента представлена на рис. 19. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа».

Рис. 19.

Схема нанесения проб в лунки планшета.

Рис. 20.

Результат амплификации в пластиковых микропланшетах.

По результатам эксперимента (рис. 20) видно что в 1 и 3 ряду амплификация прошла, так как интенсивность флуоресценции заметно возросла. Темное пятнышко по центру лунок – это некоторый объем воздуха который образуется при покрытии плашки пленкой. Это указывает на то, что практически весь объем лунки заполнен образцом.

В этих же рядах в лунках под номером 5 сигнал значения не изменил. Это доказывает то, что матрица здесь не присутствовала. Контроль номер 2 также сработал, так как флуоресценция в 4 ряду свое значение не изменила. Второй и пятый ряды практически не флуоресцируют. Это подтверждает наличие в их лунках воды. Значения сигнала флуоресценции каждой лунки представлены в таблице 4. Графическое изображение полученной картины представлено на рис. 21.

1 столбец

2 столбец

3 столбец

4 столбец

5 столбец

1 ряд

49,82

73,54

84,25

83,68

38,91

2 ряд

17,61

35,76

34,41

31,66

24,56

3 ряд

72,26

92,30

117,95

113,88

41,02

4 ряд

26,88

34,04

40,36

43,36

40,88

5 ряд

10,34

12,81

17,81

20,89

19,08

Таблица 4

Рис. 21.

Диаграмма, отображающая уровень сигнала в лунках пластиковой микроплашки.


На какие положения опиралась математическая исследовательская программа античности?
Первые научные программы сформировались в Древней Греции с VI по III в. до н. э. и надолго определили развитие науки. К ним относятся математическая, континуальная и атомистическая научные программы. Каждая программа формировалась в несколько этапов. Математическая программа, выросшая из философии Пифагора и Платона, начала развиваться ...

Ионообменная ЖХВД белков. Хроматофокусирование
Хроматофокусирование - метод ионообменной хроматографии, использующий в качестве инструмента разделения градиент рН, формируемый в слое сорбента внутри колонки. Метод успешно применяют для разделения цвиттер-ионных биологических макромолекул [1-3]. Формирование внутреннего градиента рН в хроматофокусировании заключается в предварительно ...

Лаборатории разных групп риска
В зависимости от уровня безопасности работы с микроорганизмами лаборатории подразделя­ют на четыре группы риска. Первая группа риска: лаборатории особого режима (максимально изолированные) с высоким индивидуальным и общественным риском. Вторая группа риска: режимные лаборатории (изолированные) с высоким индивидуальным и низким обществ ...