Материалы » Разработка условий оптимизации процесса амплификации ДНК » Проведение ПЦР реакции в пластиковых микропланшетах

Проведение ПЦР реакции в пластиковых микропланшетах

ПЦР проводили по вышеописанному протоколу (используя кит) на планшете с 25 лунками. ПЦР смесь добавляли в лунки объемом 1 мкл. Использовалось 2 вида контрольных проб. Первый контроль – это пцр смесь без матрицы. Второй контроль – это водный раствор SYBRgreen той же концентрации что и в пцр смеси. Схема эксперимента представлена на рис. 19. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа».

Рис. 19.

Схема нанесения проб в лунки планшета.

Рис. 20.

Результат амплификации в пластиковых микропланшетах.

По результатам эксперимента (рис. 20) видно что в 1 и 3 ряду амплификация прошла, так как интенсивность флуоресценции заметно возросла. Темное пятнышко по центру лунок – это некоторый объем воздуха который образуется при покрытии плашки пленкой. Это указывает на то, что практически весь объем лунки заполнен образцом.

В этих же рядах в лунках под номером 5 сигнал значения не изменил. Это доказывает то, что матрица здесь не присутствовала. Контроль номер 2 также сработал, так как флуоресценция в 4 ряду свое значение не изменила. Второй и пятый ряды практически не флуоресцируют. Это подтверждает наличие в их лунках воды. Значения сигнала флуоресценции каждой лунки представлены в таблице 4. Графическое изображение полученной картины представлено на рис. 21.

1 столбец

2 столбец

3 столбец

4 столбец

5 столбец

1 ряд

49,82

73,54

84,25

83,68

38,91

2 ряд

17,61

35,76

34,41

31,66

24,56

3 ряд

72,26

92,30

117,95

113,88

41,02

4 ряд

26,88

34,04

40,36

43,36

40,88

5 ряд

10,34

12,81

17,81

20,89

19,08

Таблица 4

Рис. 21.

Диаграмма, отображающая уровень сигнала в лунках пластиковой микроплашки.


Полимерия. Пример и схема. Особенности наследования количественных признаков
Полимерия – на один признак влияют несколько неаллельных, но сходно действующих генов. Такие гены наз полимерными (множественными). Они обладают аддитивным (суммирующим) действием, т.е. чем больше таких генов, тем ярче выражен признак, который они определяют. 15:1 или 1:4:6:4:1 – для качественных признаков; 1:4:6:4:1 – для колич (F2). О ...

Накопление местных удобрений
В земледелии урожай сельскохозяйственных культур выносит из почвы определённое количество питательных веществ, для восполнения потерь питательных веществ необходимо вносить удобрения. Выделяют 2 большие группы удобрений: минеральные и органические. Минеральные – азотные, фосфорные, калийные, комплексные, микроудобрения. Органические – н ...

Взаимосвязь энергетических и конструктивных процессов в клетке
Взаимосвязь между реакциями, в результате которых энергия выделяется и может быть запасена в клетке, и теми, в которых она затрачивается на построение веществ клетки, удобнее всего рассмотреть на примере метаболизма глюкозы, чаще всего выступающих в качестве «энергодающих» субстратов. При этом нужно иметь в виду два обстоятельства. Перв ...