BioNow

Для выявления продуктов амплификации в режиме реального времени используют следующие наиболее распространенные подходы.

Выщепление 5' концевой метки (TaqMan Assay).

Данная методика основана на использовании 5'-экзонуклеазной активности полимеразы. В реакционную смесь добавляют ДНК-зонды, в состав которых входит флуоресцентная метка в 5'-положении и гаситель флуоресценции в 3'-положении, а также фосфатная группа в 3'-положении. Эти зонды имеют места посадки внутри амплифицируемой области. Гаситель поглощает испускаемое флуоресцентной меткой излучение, а фосфатная группа в 3'-положении блокирует полимеразу (Рис. 1) В ходе ПЦР во время стадии отжига праймеров происходит присоединение ДНК-зонда к комплементарной цепи ДНК, причем чем больше продуктов амплификации образуется в ходе ПЦР, тем больше молекул зондов свяжется с соответствующими ампликонами. Во время стадии элонгации полимераза синтезирует комплементарную цепь ДНК и при достижении зонда начинает его расщеплять благодаря наличию 5'-экзонуклеазной активности. Таким образом происходит разъединение флуоресцентной метки и гасителя, что приводит к увеличению детектируемого свечения [13]. Очевидно, что чем больше ампликонов было наработано в ходе ПЦР на данный момент времени, тем интенсивнее будет свечение[19].

Рис. 1

. Схема ПЦР в реальном времени с использованием зонда TaqMan.[7]

С помощью серийных разведений образцов ДНК определили чувствительность системы ПЦР в реальном времени, которая в обсуждаемой модели позволяла обнаруживать 0,28 нг (приблизительно 20 копий ) ДНК в пробе[8]

Система удобрений в полевом севообороте
Система удобрений – комплекс агротехнических и организационно-хозяйственных мероприятий по наиболее рациональному, плановому применению удобрений в целях повышения урожайности сельскохозяйственных культур и плодородия почвы. ОАО "Надежда" располагается в зоне недостаточного увлажнения, и поэтому желательно проводить основное ...

Аннотация
Данная работа имеет практическое значение, т. к. в настоящее время используется большое количество разнообразных веществ, которые чужды метаболизму живых организмов. Такие вещества имеют общее название - ксенобиотики. Их влияние на развитие и рост живых объектов пока мало изучено, однако на сегодняшний день очень активно ведется работа ...

Выводы
1. Европейская ряпушка обитает в озёрах преимущественно в бассейнах Балтийского моря и частично в бассейнах Белого, Баренцева и Каспийского морей. Половая зрелость наступает на втором году жизни при длине тела 20 – 26 см., и массе 25 – 50 г. Нерест поздней осенью в начале зимы при температуре несколько выше 0 0С. Плодовитость 3 – 5 тыс ...