Виды RealTime ПЦР

Для выявления продуктов амплификации в режиме реального времени используют следующие наиболее распространенные подходы.

Выщепление 5' концевой метки (TaqMan Assay).

Данная методика основана на использовании 5'-экзонуклеазной активности полимеразы. В реакционную смесь добавляют ДНК-зонды, в состав которых входит флуоресцентная метка в 5'-положении и гаситель флуоресценции в 3'-положении, а также фосфатная группа в 3'-положении. Эти зонды имеют места посадки внутри амплифицируемой области. Гаситель поглощает испускаемое флуоресцентной меткой излучение, а фосфатная группа в 3'-положении блокирует полимеразу (Рис. 1) В ходе ПЦР во время стадии отжига праймеров происходит присоединение ДНК-зонда к комплементарной цепи ДНК, причем чем больше продуктов амплификации образуется в ходе ПЦР, тем больше молекул зондов свяжется с соответствующими ампликонами. Во время стадии элонгации полимераза синтезирует комплементарную цепь ДНК и при достижении зонда начинает его расщеплять благодаря наличию 5'-экзонуклеазной активности. Таким образом происходит разъединение флуоресцентной метки и гасителя, что приводит к увеличению детектируемого свечения [13]. Очевидно, что чем больше ампликонов было наработано в ходе ПЦР на данный момент времени, тем интенсивнее будет свечение[19].

Рис. 1

. Схема ПЦР в реальном времени с использованием зонда TaqMan.[7]

С помощью серийных разведений образцов ДНК определили чувствительность системы ПЦР в реальном времени, которая в обсуждаемой модели позволяла обнаруживать 0,28 нг (приблизительно 20 копий ) ДНК в пробе[8]


Белки крови
Клиническое значение: Повышенное содержание общего белка сыворотки крови (гиперпротеинемия) наблюдается или при повышенном синтезе белка, преимущественно глобулинов, или при потере жидкости организмом. Повышенный синтез наблюдается при макроглобулинемии, хронических воспалениях, например при хроническом полиартрите, у кошек при перитон ...

Метод определения парциального давления углекислого газа в капиллярной крови пловцов
Парциальное давление углекислого газа в крови определяли с помощью потенциометрических микроэлектродов [26]. ...

Реабсорбция
Отфильтрованная жидкость течет по извитым канальцам. Капилляры из клубочка расходятся, образуя свободную сеть вокруг своих канальцев. Они оборачиваются вокруг канальца и соприкасаются с ним во многих местах. По мере продвижения вниз, в сторону мозгового вещества почки, кровь капилляров реабсорбирует (обратно всасывает) ценные вещества ...