Виды RealTime ПЦР

Для выявления продуктов амплификации в режиме реального времени используют следующие наиболее распространенные подходы.

Выщепление 5' концевой метки (TaqMan Assay).

Данная методика основана на использовании 5'-экзонуклеазной активности полимеразы. В реакционную смесь добавляют ДНК-зонды, в состав которых входит флуоресцентная метка в 5'-положении и гаситель флуоресценции в 3'-положении, а также фосфатная группа в 3'-положении. Эти зонды имеют места посадки внутри амплифицируемой области. Гаситель поглощает испускаемое флуоресцентной меткой излучение, а фосфатная группа в 3'-положении блокирует полимеразу (Рис. 1) В ходе ПЦР во время стадии отжига праймеров происходит присоединение ДНК-зонда к комплементарной цепи ДНК, причем чем больше продуктов амплификации образуется в ходе ПЦР, тем больше молекул зондов свяжется с соответствующими ампликонами. Во время стадии элонгации полимераза синтезирует комплементарную цепь ДНК и при достижении зонда начинает его расщеплять благодаря наличию 5'-экзонуклеазной активности. Таким образом происходит разъединение флуоресцентной метки и гасителя, что приводит к увеличению детектируемого свечения [13]. Очевидно, что чем больше ампликонов было наработано в ходе ПЦР на данный момент времени, тем интенсивнее будет свечение[19].

Рис. 1

. Схема ПЦР в реальном времени с использованием зонда TaqMan.[7]

С помощью серийных разведений образцов ДНК определили чувствительность системы ПЦР в реальном времени, которая в обсуждаемой модели позволяла обнаруживать 0,28 нг (приблизительно 20 копий ) ДНК в пробе[8]


Шар или картофелина?
Рис. “Неделна правда” (ЧССР) Стоило человеку однажды посмотреть на планету Земля из кос­мических далей, как сразу же появилось поэтическое название “голубая планета”. Но специальному оборудованию, которым насыщены искусст­венные спутники Земли, не дано поэтизировать, и потому они “взирают” на голубую планету беспристрастным оком. ...

Клеточная инженерия у растений
Клеточная инженерия у растений заключается в получении растений из одной клетки, а также в генетических манипуляциях с изолированными клетками, направленными на преобразование их генотипов. Метод получения растений из одной клетки основан на способности тканей растений ряда видов к неорганическому росту на специальных искусственных сре ...

Промеры сердца маньчжурского зайца
Сердце – конусовидный мышечный орган, расположенный в грудной полости в средостении на уровне 3 – 6-го ребра, несколько сдвинуто влево. Широкое основание сердца направлено вверх. С ним связаны крупные сосуды, подходящие и отходящие от сердца. Сердце является основным органом кровообращения. Передняя стенка сердца более выпуклая, чем зад ...