Кинетические параметрыСтраница 4
в) серия разведений стандартной ДНК должна охватывать весь диапазон возможных концентраций субстрата в экспериментальной ДНК.
Если достаточно определить лишь относительную концентрацию субстрата, для построения калибровочного графика удобно использовать серию разведений одного из экспериментальных образцов. В тех случаях, когда образцы могут сильно отличаться по примесям и доле амплифицируемого фрагмента в реакционной смеси, имеет смысл при наладке эксперимента приготовить серию разведений каждого из них и сравнить эффективности.
В тех случаях, когда требуется оценить "абсолютное" количество субстрата, выбор стандартов для градуировочного графика представляет собой более сложную задачу, поскольку с одной стороны, необходимо знать точное число. Для определения количества матрицы в RT-PCR предложены следующие варианты стандартов:
1. очищенный RT-PCR-продукт;
2. рекомбинантная ДНК;
3. рекомбинантная РНК с последующей обратной транскрипцией;
4. синтетический олигонуклеотид, содержащий амплифицируемую последовательность.
При использовании очищенных препаратов в реакцию всегда необходимо добавлять неспецифические ДНК, чтобы приблизить условия реакции к экспериментальным. Для RT-PCR это могут быть, например, обратные транскрипты бактериальной РНК, polyA-РНК, тРНК или рРНК. Однако насколько бы условия реакции со стандартными образцами не были приближены к экспериментальным, "абсолютное" определение по-прежнему остается расчётом относительно стандарта.
Антигенные особенности
V.cholerae имеет соматический термостабильный О-антиген и жгутиковый термолабильный H-антиген.
О-Аг. По структуре О-Аг выделяют 139 серогрупп. Возбудитель холеры относится к серогруппам 01 и 0139 (его обозначение V.cholerae 01 или V.cholerae 0139), другие представители вида V.cholerae не являются возбудителями холеры, но могут вызывать ...
Единство происхождения человеческих рас
Путь развития всего человечества был единым — через труд, через организацию и развитие общества. Когда люди достигли определенной приспособленности к прямой походке и трудовой деятельности, эволюция их физического склада замедлилась и свелась к эволюции мелких второстепенных признаков. По этой причине в настоящее время на Земле обитает ...
Питание
Волнистые попугаи питаются семенами различных злаков и трав, предпочитая семена травы Митчелла (Mitchell grass), однако наслаждаются и семенами дикого проса шириной 0,5-2,5 мм и весом 0,3-1,3 мг[1]. Ежедневно потребляет до 5 г корма - половину утром, а вторую половину корма - вечером. Лишь изредка в виде исключения - насекомыми. Питание ...