Кинетические параметрыСтраница 4
в) серия разведений стандартной ДНК должна охватывать весь диапазон возможных концентраций субстрата в экспериментальной ДНК.
Если достаточно определить лишь относительную концентрацию субстрата, для построения калибровочного графика удобно использовать серию разведений одного из экспериментальных образцов. В тех случаях, когда образцы могут сильно отличаться по примесям и доле амплифицируемого фрагмента в реакционной смеси, имеет смысл при наладке эксперимента приготовить серию разведений каждого из них и сравнить эффективности.
В тех случаях, когда требуется оценить "абсолютное" количество субстрата, выбор стандартов для градуировочного графика представляет собой более сложную задачу, поскольку с одной стороны, необходимо знать точное число. Для определения количества матрицы в RT-PCR предложены следующие варианты стандартов:
1. очищенный RT-PCR-продукт;
2. рекомбинантная ДНК;
3. рекомбинантная РНК с последующей обратной транскрипцией;
4. синтетический олигонуклеотид, содержащий амплифицируемую последовательность.
При использовании очищенных препаратов в реакцию всегда необходимо добавлять неспецифические ДНК, чтобы приблизить условия реакции к экспериментальным. Для RT-PCR это могут быть, например, обратные транскрипты бактериальной РНК, polyA-РНК, тРНК или рРНК. Однако насколько бы условия реакции со стандартными образцами не были приближены к экспериментальным, "абсолютное" определение по-прежнему остается расчётом относительно стандарта.
Цели и задачи
1. Цели:
А) определить влияние нитрата аммония на рост проростков пшеницы;
Б) определить устойчивость данного вида растений к определенным концентрациям нитрата аммония.
2. Задачи:
А) обработать нитратом аммония разных концентраций семена пшеницы;
Б) определить при каких концентрациях будет наблюдаться стимуляция роста данного раст ...
Методы обнаружения вирусов
Лабораторные методы
при диагностике вирусных инфекций включают:
• выделение и идентификацию возбудителя;
• обнаружение и определение титров противовирусных AT;
• обнаружение Аг вирусов в образцах исследуемого материала;
• микроскопическое исследование препаратов исследуемого материала.
Забор материала.
При заборе материала для ис ...
Интерференционная микроскопия
Интерференционная микроскопия
объединяет принципы фазово-контрастной и поляризационной микроскопии. Метод применяют для получения контрастного трёхмерного изображения неокрашенных объектов. Принцип метода основан на раздвоении светового потока в микроскопе; один луч проходит через объект, другой — мимо него. Оба луча соединяются в о ...