Кинетические параметрыСтраница 4
в) серия разведений стандартной ДНК должна охватывать весь диапазон возможных концентраций субстрата в экспериментальной ДНК.
Если достаточно определить лишь относительную концентрацию субстрата, для построения калибровочного графика удобно использовать серию разведений одного из экспериментальных образцов. В тех случаях, когда образцы могут сильно отличаться по примесям и доле амплифицируемого фрагмента в реакционной смеси, имеет смысл при наладке эксперимента приготовить серию разведений каждого из них и сравнить эффективности.
В тех случаях, когда требуется оценить "абсолютное" количество субстрата, выбор стандартов для градуировочного графика представляет собой более сложную задачу, поскольку с одной стороны, необходимо знать точное число. Для определения количества матрицы в RT-PCR предложены следующие варианты стандартов:
1. очищенный RT-PCR-продукт;
2. рекомбинантная ДНК;
3. рекомбинантная РНК с последующей обратной транскрипцией;
4. синтетический олигонуклеотид, содержащий амплифицируемую последовательность.
При использовании очищенных препаратов в реакцию всегда необходимо добавлять неспецифические ДНК, чтобы приблизить условия реакции к экспериментальным. Для RT-PCR это могут быть, например, обратные транскрипты бактериальной РНК, polyA-РНК, тРНК или рРНК. Однако насколько бы условия реакции со стандартными образцами не были приближены к экспериментальным, "абсолютное" определение по-прежнему остается расчётом относительно стандарта.
Результаты и обсуждение
Результаты исследования активности КПН и ФМСФ-КП в гипофизе, гипоталамусе, стриатуме, больших полушариях, четверохолмии и надпочечниках под влиянием пирроксана представлены на двух диаграммах.
В ходе проведения эксперимента было установлено, что получение животными пирроксана приводит к существенному снижению активности ферментов о ...
Паращитовидные железы
Паращитовидные железы (glandulae parathyroideae) имеют вид округлых или овальных небольших телец, расположенных на задней поверхности долей щитовидной железы. Размеры каждой железы колеблются: длина — 4 — 8 мм, ширина— 34 мм, толщина — 2 — 3 мм. Число этих телец непостоянно (от 2 до 78), в среднем 4 — по 2 железы позади каждой боковой д ...
Антропогенные факторы
В современную эпоху деятельность человека оказывает огромное влияние на природные условия всей планеты. Особенно сильно изменены флора и фауна суши. Многие виды животных полностью уничтожены человеком, а еще большее количество видов находится под угрозой их исчезновения.
Растительные покровы на большей части поверхности континентов пре ...