Кинетические параметрыСтраница 4
в) серия разведений стандартной ДНК должна охватывать весь диапазон возможных концентраций субстрата в экспериментальной ДНК.
Если достаточно определить лишь относительную концентрацию субстрата, для построения калибровочного графика удобно использовать серию разведений одного из экспериментальных образцов. В тех случаях, когда образцы могут сильно отличаться по примесям и доле амплифицируемого фрагмента в реакционной смеси, имеет смысл при наладке эксперимента приготовить серию разведений каждого из них и сравнить эффективности.
В тех случаях, когда требуется оценить "абсолютное" количество субстрата, выбор стандартов для градуировочного графика представляет собой более сложную задачу, поскольку с одной стороны, необходимо знать точное число. Для определения количества матрицы в RT-PCR предложены следующие варианты стандартов:
1. очищенный RT-PCR-продукт;
2. рекомбинантная ДНК;
3. рекомбинантная РНК с последующей обратной транскрипцией;
4. синтетический олигонуклеотид, содержащий амплифицируемую последовательность.
При использовании очищенных препаратов в реакцию всегда необходимо добавлять неспецифические ДНК, чтобы приблизить условия реакции к экспериментальным. Для RT-PCR это могут быть, например, обратные транскрипты бактериальной РНК, polyA-РНК, тРНК или рРНК. Однако насколько бы условия реакции со стандартными образцами не были приближены к экспериментальным, "абсолютное" определение по-прежнему остается расчётом относительно стандарта.
Обработка данных
Таблица 1. Показатели роста проростков пшеницы (в см)
Вариант опыта
Контроль
Концентрация 1%
Концентрация 10%
№ п/п
Зеленая часть
Корень
Зеленая часть
Корень
Зеленая часть
Корень
1
3.0
10.8
2.3
9.0
0.4
1.5
2
4.2
11.4
4.8
15.4
2.1
2.4
3
7.0
11.6 ...
На какие положения опиралась математическая исследовательская программа
античности?
Первые научные программы сформировались в Древней Греции с VI по III в. до н. э. и надолго определили развитие науки. К ним относятся математическая, континуальная и атомистическая научные программы. Каждая программа формировалась в несколько этапов.
Математическая программа, выросшая из философии Пифагора и Платона, начала развиваться ...
Зубы и глотка
Между преддверием полости рта и собственно полостью рта находятся зубы, расположенные в зубных ячейках альвеолярных отростков верхней и нижней челюстей. Альвеолярные отростки челюстей покрыты слизистой оболочкой — десной, которая прочно сращена с надкостницей альвеолярных отростков.
У новорожденного зубы отсутствуют. В процессе роста и ...