BioNow

Преимущество микроорганизмов над другими организмами состоит, прежде всего, в высокой скорости размножения, гаплоидности и большой разрешающей способности методов генетического анализа этих организмов. Формирование на питательных средах многомиллиардных популяций бактерии в течение суток позволяет проводить быстрый и точный анализ происходящих в них количественных и качественных изменений. Сравнительная простота постановки эксперимента обусловливает эффективность селективного анализа микробной популяции и выделение единичных особей, мутировавших с частотой 10 и выше. Наконец, гаплоидность бактерий, имеющих в отличие от эукариотов одну хромосому, т.е. одну группу сцепления генов, обусловливает отсутствие у них явление доминантности, что способствует быстрому выявлению мутировавших генов.

Материальной основой наследственности, определяющей генетические свойства всех организмов, в том числе бактерий и вирусов, является хромосома, представляющая собой огромную молекулу ДНК в виде двойной спирали, замкнутой в кольцо. Она и является носителем генетической информации. Вдоль хромосомы линейно располагаются генифунхционально неоднородные генетические детерминанты, т.е. фрагменты молекулы ДНК", контролирующие синтез одного белка или пептида. Совокупность генов, локализованных в гаплоидном (одинарном) наборе хромосом данного организма, называется геномом или генотипом. В более широком смысле генотип - совокупность всех наследственных факторов организма, как ядерных (геном), так и неядерных, вне хромосомных (пластидные и цитоплазматические) наследственных факторов. Генотип - носитель наследственной информации, передаваемой от поколения к поколению. Он представляет собой систему, контролирующую фенотип организма. Фенотипом является внешний вид организма со всеми внешними и внутренними признаками. Фенотип бактерий есть результат взаимодействия ее генотипа и среды. Появление в организме новых наследственно передаваемых свойств может быт вызвано разными типами изменений в генетическом аппарате. Источником последовательной изменчивости могут быть мутации генов. Под мутацией понимают внезапные естественные (спонтанные) или вызванные искусственно (индуцированные) стойкие изменения наследственных структур (генов, хромосом), а также обусловленные ими различные изменения свойств и признаков организма. При этом в двойной спирали ДНК могут происходить следующие изменения:

- замещение пары оснований, имевшихся в исходной молекуле ДНК другой парой;

- выпадение пары оснований из молекулы ДНК;

- внедрение новой пары оснований в молекулу ДНК;

- инверсия - поворот нескольких пар оснований на 180 ° С.

Таким образом, в основе мутации лежат молекулярные изменения в хромосоме. Мутации у бактерий выявляются при наследственных изменениях любого признака микроба. Классифицируют мутации по происхождению, локализации на хромосоме клетки и другим признакам. Подобное деление носит условный характер. К спонтанным мутациям относят такие мутации, причину возникновения которых трудно и даже невозможно связать с действием определенного фактора (мутагена). Они образуются самопроизвольно в любой популяции микроорганизмов без видимого внешнего воздействия. Спонтанные мутанты образуются до воздействия селекционирующих факторов, которые лишь отбирают признаки, сформировавшиеся в популяции мутировавших бактериальных клеток. Так, например, антибиотикорезистентные клетки просуществуют в чувствительной бактериальной популяции, а не образуются в результате воздействия на нее соответствующего антибиотика. Последний только селекционирует резистентные особи, создавая условия для их размножения. Индуцирующие мутации возникают в результате обработки микроорганизмов мутагенными агентами (ультрафиолетовые и рентгеновые лучи, быстрые нейтроны и протоны, действие температуры, кислоты, щелочи, красители, соли металлов и др.)

Разные мутагены отличаются по активности и механизму действия. Одни вызывают изменения числа и структуры хромосом, другие изменяют последовательность азотистых оснований в молекуле ДНК.

Мутагены используются в селекции сельскохозяйственных растений и микроорганизмам с целью получения продуктивных и полезных форм.

Микроорганизмам, как и высшим организмам, свойственны генетические рекомбинации.

Рекомбинация - это перегруппировка генетического материала (ДНК) родительских генетических структур (хромосом, плазмид и др.), приводящая к появлению новых сочетаний генов у потомства. Основной механизм рекомбинации - кроссинговер- перекрест хромосом, при котором происходит разрыв участков двух генетических структур, их обмен и воссоединение. У микроорганизмов рекомбинация осуществляется в результате обмена участками двух молекул ДНК, либо их фрагментом. Генетические рекомбинации возникают в результате комплексных процессов, они могут захватывать большие участки хромосомы или происходить в пределах отдельных генов. Существуют специальные гены, детерминирующие рекомбинационную способность клеток - реципиентов.

Метод определения активности карбоксипептидазы Н
Активность КП Н определяли флюорометрическим методом по Supattapone S., Fricker L.D., Snyder S.H. [262]. Для определения активности фермента смешивали 150 мкл (в случае контрольной пробы) или 140 мкл (в случае опытной пробы) вышеуказанного буфера с 50 мкл гомогената ткани. Опытные пробы содержали 1 мкМ ГЭМЯК. Пробы преинкубировались 8 ...

Схема эксперимента
...

Методы диагностики грибковых инфекций. Микроскопия
Микроскопия — один из основных методов выявления возбудителей микозов. Позволяет проводить экспресс-диагностику микозов и получать результат в течение 1-2 ч, тогда как для выделения культуры возбудителя необходимы недели. Для экспресс-диагностики препараты часто необходимо окрашивать специальными красителями, так как простая окраска ге ...