Подвижность в геле
Оценка подвижности в геле основана на различии в подвижности между свободными РНК и РНК-белковыми комплексами при их миграции в нативном полиакриламидном геле. Возрастающий размер комплекса, а также небольшой положительный заряд связанных с белками нуклеиновых кислот вызывает различие в их подвижности.
Метод позволяет напрямую оценить стехиометрию РНК-белкового комплекса. Если связывается более чем один белок, то видны дополнительные сдвиги (supershifts) в мобильности РНК. При добавления антител, эту особенность можно использовать для идентификации белков в комплексе, когда для образования комплекса используются неизвестные препараты белка.
Основная проблема выполнения данной методики – это выбор условий, обеспечивающих специфическое РНК-белковое связывание. Главное при этом - выдержать высокую концентрацию солей (300-500 mM NaCI или KC1), но при этом надо учитывать, что высокая концентрация соли зачастую увеличивает и процент диссоциации комплекса при электрофорезе. Таким образом, концентрация солей должна быть оптимизирована в зависимости от конкретного эксперимента. Многие эксперименты по определению подвижности в геле РНК-белковых комплексах изучаются в 50 mM трис-глициновых буферах, а, например, специфические комплексы Escherchia coli требуют по крайней мере дополнительного добавления 150 mM Na
и 5 mM Mg
.
Если комплекс чувствителен к повышению солевой концентрации, неспецифическое связывание может быть уменьшено добавлением носителя РНК [23].
Опишите процесс хемосинтеза. Какие организмы могут быть отнесены к
хемосинтетикам? За счет какой энергии эти организмы осуществляют процессы
синтеза органических веществ?
Хемосинтезом называется процесс синтеза органического вещества с использованием энергии окисления неорганических веществ. Хемоавтотрофы используют в качестве источника углерода СО2, а в качестве источника энергии - энергию, вьщеляющуюся при окислении водорода, сероводорода, серы, железа (II) аммиака, нитритов и других неорганических вещ ...
Вступление
Анализируя содержание некоторых книг, журналов и газет о глобальных катастрофах я пришел к выводу, что здесь кроется какая-то вселенская тайна. А мифы и сказания разных времен и народов основаны на реальных событиях, и несут в себе остатки забытых знаний. В качестве примеров можно привести сведения о свершившемся в древние времена “В ...
Приборы для взятия проб
Почвенный образец берут буром, лопатой и ножом. В поле перед взятием образца их тщательно очищают, затем обрабатывают спиртом и обжигают. Можно ограничиться очисткой этих предметов, если затем несколько раз воткнуть их в почву изучаемого горизонта. Укладывают образец в заранее приготовленную стеклянную широкогорлую стерильную банку, зак ...