Умножение количества индивидуального белка
Перспектива наработки большого количества индивидуального белка в качестве продукта деятельности вторгнувшегося с плазмидой в бактерию гена. Этот ген должен быть тем самым геном, который изначально кодировал синтез нужного нам белка. Только и всего! Но посмотрим, так ли просто получить этот ген, исходя только из наличия в нашем распоряжении самого белка? Будем решать эту задачу для белка животного происхождения. Здесь она в определенной мере сложнее ввиду сплайсинга иРНК и практически важнее. В ее решении явно просматриваются два этапа:
1) Получить индивидуальную иРНК, ответственную за синтез интересующего нас белка.
2) На базе этой иРНК создать двунитевую структуру ДНК, воспроизводящую если и не весь ген, то его «значащую» часть — ту совокупность последовательных участков, которые диктуют синтез соответствующих экзонов иРНК. Такой «рационально укороченный» ген можно встраивать в плазмиду. Он в бактерии-реципиенте обеспечит синтез полноценной иРНК, а вслед за ней и наработку нужного нам белка. Мне удобнее будет начать с этого второго этапа.
Характеристика штамма LPM-4
Штамм LPM-4 был выделен в лаборатории физиологии микроорганизмов ИБФМ РАН к.б.н. Чистяковой Т. И. из активного ила Пущинских очистных сооружений методом накопительной культуры [6]. Клетки неподвижны, колонии на твердой питательной среде с ЭДТА через неделю роста 0,1-0,3 см в диаметре, круглые, перламутровые с синеватым блеском. Аэроб, н ...
Навигация аксона, зависящая и не зависящая от
клетки-мишени
Какие внеклеточные сигналы управляют конусом роста? Рамон-и-Кахаль сначала предложил хемоаттрактантную модель управления аксоном, согласно которой конусы роста аксонов следуют по градиенту концентрации некоторых молекул, вырабатываемых клетками-мишенями. Такой механизм возможен для роста аксона, когда расстояние между телом нейрона и ег ...
Метод определения активности
карбоксипептидазы Н
Активность КП Н определяли флюорометрическим методом по Supattapone S., Fricker L.D., Snyder S.H. [262].
Для определения активности фермента смешивали 150 мкл (в случае контрольной пробы) или 140 мкл (в случае опытной пробы) вышеуказанного буфера с 50 мкл гомогената ткани. Опытные пробы содержали 1 мкМ ГЭМЯК. Пробы преинкубировались 8 ...