Методы исследования. Метод введения половых стероидных гормонов
При изучении влияния половых гормонов на КП Н и ФМСФ-ингибируемую карбоксипептидазу in vivo все препараты вводились внутрибрюшинно в виде растворов в оливковом масле. Вводимый объем был равен 0,1 мл. Дозы половых гормонов были следующими: 1) 3 и 30 мг на кг массы в случае пропионата тестостерона; 2) 1 и 10 мг на кг массы в случае прогестерона. Контрольным животным вводили равный объем оливкового масла. В работе использовали следующие группы животных.
Группа |
Пол |
Вводимое вещество |
Доза |
1 |
Самки |
Пропионат тестостерона |
3 мг на кг массы тела |
2 |
Самцы |
Пропионат тестостерона |
3 мг на кг массы тела |
3 |
Самки |
Пропионат тестостерона |
30 мг на кг массы тела |
4 |
Самки |
Прогестерон |
1 мг на кг массы тела |
5 |
Самцы |
Прогестерон |
1 мг на кг массы тела |
6 |
Самки |
Прогестерон |
10 мг на кг массы тела |
7 |
Самцы |
Оливковое масло |
– |
8 |
Самки |
Оливковое масло |
– |
9 |
Самцы |
– |
– |
10 |
Самки |
– |
– |
Животных декапитировали через 0,5, 4 и 24 часа после инъекции. Затем извлекали головной мозг, половые железы, надпочечники и помещали их в охлажденный до 4оС физиологический раствор (0,9% раствор хлорида натрия в воде). Все дальнейшие процедуры, если не оговорено иначе, проводили при 4оС.
Головной мозг тщательно очищали от оболочек, кровеносных сосудов и извлекали гипофиз и гипоталaмус.
Яичники и надпочечники тщательно очищали от жира.
Образцы тканей хранили при температуре -20оС не более одного месяца до использования.
Для исследования влияния половых гормонов на КП Н и ФМСФ-ингибируемую карбоксипептидазу in vitro гомогенаты тканей инкубировали с гормонами или оливковым маслом в течение 60 мин при 4оС. Концентрации гормонов соответствовали дозам при введении in vivo. Затем определяли активность ферментов как описано ниже.
Для определения активности ферментов образцы тканей взвешивали, а затем гомогенизировали в 50 мМ натрий-ацетатном буфере (pH 5,6), содержащем 50 мМ хлорида натрия в соотношении 1:400 (вес:объем).