Показатели роста штамма LPM-4 при кометаболизме
ЭДТА и глюкозыСтраница 1
В таблице 3.1.4. представлены сравнительные результаты показателей роста штамма LPM-4 на различных вариантах сред. На средах с глюкозой суммарная биомасса включает биомассу, образованную как за счет потребления ЭДТА, так и за счет потребления глюкозы. Поскольку концентрация ЭДТА во всех вариантах сред была одинаковой (0,873 г/л), можно предположить, что количество биомассы, образованной из ЭДТА на средах с глюкозой, было таким же, как в контроле (0,196 г/л). Следовательно, если вычесть из суммарной биомассы количество биомассы, образованной из ЭДТА, мы получим количество биомассы, образованной из глюкозы.
Из таблицы видно, что наибольший выход клеток по массе из глюкозы достигается на среде с добавлением глюкозы на 3 сутки роста бактерий. Поскольку ЭДТА и глюкоза характеризуются различным энергосодержанием, правильнее сравнивать выход из этих субстратов не по массе, а по энергии. С этой целью рассчитывали энергетический выход клеток. Наибольший выход биомассы по энергии из глюкозы характерен для опыта на среде с добавлением глюкозы на 3 сутки роста бактерий.
Таким образом показано, что бактериальный штамм LPM-4, облигатный деструктор ЭДТА, не может использовать глюкозу в качестве единственного источника углерода и энергии, но способен метаболизировать ее в присутствии ЭДТА. Установлено, что ЭДТА индуцирует ассимиляцию глюкозы и является источником азота для роста клеток на глюкозе. Индукция ассимиляции неростового субстрата у штамма LPM-4 требует продолжительной лаг-фазы и сопряжена с деградацией ЭДТА. Явление совместного метаболизма ЭДТА и глюкозы можно назвать кометаболизмом.
Кометаболизм – трансформация неростового субстрата в присутствии ростового субстрата или иного метаболизируемого соединения. В данном
Таблица 3.1.4.
Показатели роста штамма LPM-4 при ассимиляции ЭДТА и глюкозы
|
Показатели
|
ЭДТА |
ЭДТА + глюкоза (до посева) |
ЭДТА + глюкоза (1 сут) |
ЭДТА + глюкоза (2 сут) |
ЭДТА + глюкоза (3 сут) |
|
Максимальная удельная скорость роста, ч-1 |
0,042 |
0,057 |
0,055 |
0,049 |
0,042 |
|
ЭДТА, г/л |
0,873 |
0,873 |
0,873 |
0,873 |
0,873 |
|
Глюкоза, г/л |
- |
0,910 |
0,977 |
1,020 |
1,060 |
|
Биомасса суммарная |
0,196 |
0,378 |
0,391 |
0,399 |
0,423 |
|
Биомасса, образованная из ЭДТА |
0,196 |
0,196 |
0,196 |
0,196 |
0,196 |
|
Биомасса, образованная из глюкозы |
- |
0,182 |
0,195 |
0,203 |
0,227 |
|
Выход клеток по массе из ЭДТА, YЭДТА, % |
22,4 |
22,4 |
22,4 |
22,4 |
22,4 |
|
Выход клеток по массе из глюкозы,Yглюкоза, % |
- |
20,0 |
20,0 |
19,9 |
21,4 |
|
Выход клеток по энергии из ЭДТА, hЭДТА, % |
32,0 |
32,0 |
32,0 |
32,0 |
32,0 |
|
Выход клеток по энергии из глюкозы, hглюкоза, % |
25,0 |
25,0 |
24,9 |
26,8 |
Протокол полимеразной цепной реакции с использованием TaqMan.
На одну пробу объемом 20 мкл смешивают:
· 8,75 мкл смеси А,
· 8,75 мкл смеси Б,
· 0,2 мкл Taq-полимеразы,
· 2 мкл ДНК.
95о С 5 мин
1 цикл
95о С 20 сек
40 циклов
62о С 20 сек
72 о С 40 сек
и по окончании нужного количества циклов
72 о С 40 сек ...
Генетическая информация.
Генетическая информация записана последовательностью нуклеотидов молекул нуклеиновых кислот (ДНК, у некоторых вирусов также РНК). Содержит сведения о строении всех (около 10 000)ферментов, структурных белков и РНК клетки, а также о регуляции их синтеза. Инфоромация о свойствах организма, которая передается по наследству. Генетическая ин ...
Определение спектра поглощения и эмисии SYBRgreen
В RealTimeПЦР используют как описано выше несколько видов зондов. В своих исследованиях мы использовали SYBR Green. При выборе зондов мы руководствовались несколькими параметрами, в том числе стоимость, совместимость с системой детекции и т.д. Технологии Molecular beacons и LightCycler стоят ощутимо дорого, и их осмысленно применять лиш ...