Введение новой генетической
информации в клетки бактерийСтраница 2
Поскольку различные умеренные фаги встраиваются в разные хромосомные сайты, при их неправильном вырезании образуются фаги, которые трансдуцируют разные хромосомные гены. Так, фаги X трансдуцируют гены, ответственные за метаболизм галактозы, или гены, контролирующие синтез биотина, а фаги ф80 – различное число генов, кодирующих ферменты биосинтеза триптофана. Были разработаны определенные генетические приемы, способствующие приобретению этими и другими фагами различных генов E. coli или генов родственных организмов. Та же стратегия с небольшими модификациями позволяет получить трансдуцирующие фаги, содержащие мутантные бактериальные гены. Такие трансдуцирующие фаги легко идентифицировать, размножить и очистить, что позволяет получать значительные количества аллелей дикого или мутантного генов Е. coli в высокоочищенном виде.
Обогащение бактериальными генами, сопровождающее их включение в геном трансдуцирующих фагов, имеет важные последствия. Рассмотрим, например, ген Е. coli, кодирующий фермент в-га-лактозидазу. Этот белок состоит из идентичных полипептидных цепей длиной 1173 аминокислотных остатка; следовательно, ген, кодирующий этот полипептид, содержит около 3600 пар нуклеотидов. Ген в-галактозидазы составляет одну тысячную генома E. coli, но в геноме трансдуцирующего вируса X lac он занимает 1/15 часть. Таким образом, ДНК фага X lac обогащена в-галактозидазным геном примерно в 100 раз больше, чем ДНК E. coli. Это упрощает выделение в-галактозидазного гена и позволяет идентифицировать его регуляторные участки и определить их нуклеотидную последовательность. Подобным же образом с получением трансдуцирующих фагов ф80 trp удалось выделить и охарактеризовать гены и регуляторные последовательности, которые образуют триптофановый оперон. Кроме того, благодаря трансдукции появилась возможность изучать влияние различных мутационных изменений на экспрессию и регуляцию генов in vivo.
Рассмотрим те свойства фагового генома, которые ответственны за его способность к специфической трансдукции. Во-первых, геном должен быть способен реплицироваться после того, как произошла инфекция. Во-вторых, он должен приобрести ковалентно сцепленный сегмент невирусной ДНК, который будет трансдуцироваться. Этот сегмент ДНК обычно имеет клеточное происхождение, но в принципе он может быть из любого источника. Он может включиться в любое место вирусного генома, если это не влияет на репликацию вирусной ДНК в инфицированой клетке хозяина или на ее способность упаковываться в зрелые фаговые частицы. Будучи составной частью фагового генома, транс-дуцируемый сегмент ДНК реплицируется вместе
с вирусной ДНК. В-третьих, гены, кодирующие структурные фаговые белки, должны быть функционально активными либо их роль должен выполнять коинфицирующий фаг или клетка-хозяин. И наконец, если мы хотим использовать трансдукцию, нам нужно найти способ разделения различных типов вирусных геномов и идентификации интересующего нас генома, поскольку трансдуциру-ющие вирусы часто инфицируют клетку совместно с вирусом дикого типа. Обычно для такого разделения используют клонирование.
История открытия
Еще в начале нашего века было известно, что водные и спиртовые экстракты, полученные из везикулярных (парных половых) желез многих видов животных и предстательной железы (простаты) человека, понижают кровяное давление у собак и кроликов. Тогда же было сделано предположение о существовании в предстательной железе "неизвестного сосуд ...
Естествознание как особая форма знания. Всеобщий характер законов природы
Все, что окружает человека, есть материя в самых разных формах ее проявления. Совокупность проявлений материи образует единую систему – Вселенную.
Развитие научного знания привело к представлению о глобальном единстве материальных миров. «Земной» атом совершенно не отличим от атома вблизи пределов наблюдаемой Вселенной, физические проц ...
Параганглии
Параганглии (paraganglia), или хромаффинные тела, содержат, подобно мозговому слою надпочечников, хромаффинные клетки и представляют собой образования, генетически связанные с симпатическими узлами.
У человека в течение его индивидуального развития хромаффинная ткань изменяется как топографически, так и количественно, она рассеяна в ра ...
