Определение активности карбоксипептидазы Н

50мкл 1% гомогената смешивали со 150мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6, в случае контрольной пробы; в случае опытной пробы 50мкл 1% гомогената смешивали со 140мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6 с добавлением 10мкл ГЭМЯК.

Смесь инкубировали 8 мин при 37°C. Реакцию начинали прибавлением 50мкл субстрата (DNS-фен-лей-арг, приготовленного на 50мМ натрий-ацетатном буфере при рН 5.6). Пробы перемешивали и инкубировали 60 мин при 37°C.

Реакцию останавливали добавлением 50мкл 1н р-ра HCl.

Для экстракции продукта DNS-фен-лей к пробам добавляли 1,5 мл хлороформа, интенсивно встряхивали в течение 60с и центрифугировали 10мин при 1000об/мин для разделения фаз.

Измерение флюоресценции проводили на флюориметре ФМЦ-2 (λex = 360нм, λex = 530нм) в кювете толщиной 1см.

Активность КПН определяли как разность в флюоресценции проб и выражали DNS-фен-лей, образовавшегося за 1мин инкубации в расчете на 1мг белка.


Биология белки обыкновенной
Систематика Царство – животные (Regnum Zoo) Подцарство – млекопитающие (Subregnum metazoo) Тип – хордовые (Philum chordata) Подтип – позвоночные (Subphilum vertebrata) Класс – млекопитающие (Classis mammalia) Подкласс – плацентарные (Subclassis eutcheria) Отряд – грызуны (Ordo rodentia) Семейство – беличьи (Familia sciuridae) Р ...

Метанаучный уровень определения объективности
Наиболее значительной характеристикой объективной реальности, фигурирующей в научной рациональности, является требование и необходимость детерминистских отношений. Наука в принципе не может обойтись без априорного (до опытного) введения однозначной причинности - даже в тех областях современной науки, где используется вероятностный вывод ...

Показатели парциального давления углекислого газа в капиллярной крови пловцов до, во время физической нагрузки и в периоде раннего восстановления
На дорабочем уровне в капиллярной крови пловцов отмечаются высокие значения парциального давления углекислого газа в силу того, что имеет место гиповентиляция легких. При выполнении теста усиливается дыхательная функция легких, что выражается в снижении рСО2. В периоде раннего восстановления происходит устранение кислородного дефицита ...