Определение активности карбоксипептидазы Н

50мкл 1% гомогената смешивали со 150мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6, в случае контрольной пробы; в случае опытной пробы 50мкл 1% гомогената смешивали со 140мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6 с добавлением 10мкл ГЭМЯК.

Смесь инкубировали 8 мин при 37°C. Реакцию начинали прибавлением 50мкл субстрата (DNS-фен-лей-арг, приготовленного на 50мМ натрий-ацетатном буфере при рН 5.6). Пробы перемешивали и инкубировали 60 мин при 37°C.

Реакцию останавливали добавлением 50мкл 1н р-ра HCl.

Для экстракции продукта DNS-фен-лей к пробам добавляли 1,5 мл хлороформа, интенсивно встряхивали в течение 60с и центрифугировали 10мин при 1000об/мин для разделения фаз.

Измерение флюоресценции проводили на флюориметре ФМЦ-2 (λex = 360нм, λex = 530нм) в кювете толщиной 1см.

Активность КПН определяли как разность в флюоресценции проб и выражали DNS-фен-лей, образовавшегося за 1мин инкубации в расчете на 1мг белка.


Экономическая оценка вклада природных экосистем в глобальную биосферную устойчивость
В 21 век международное сообщество вошло со всем грузом экологических проблем 20 века. Эти проблемы тем более сложны, поскольку их надо решать одновременно со сглаживанием неравенства экономического развития стран и их экономической интеграцией. В мире растет стремление направить развитие на эффективное совмещение производства экономичес ...

Показатели минерального обмена в плазме крови
Клиническое значение Кальций Пониженное содержание кальция наблюдается при гипопаратиреозе, нарушении всасывания кальция, недостатке витамина D, при рахите, почечной недостаточности. Повышенное содержание кальция отмечено при гиперпаратиреозе, гипертиреозе, злокачественных опухолях с метастазами в кости, при гипервитаминозе D. Опасным ...

Тип кольчатые черви. Дождевые черви
Дождевые, или земляные, черви хорошо знакомы каждому. В сырую погоду — после дождя — они появляются на поверхности земли (потому их и назвали дождевыми), а в остальное время держатся в почве. Любители удить рыбу, которым черви нужны для наживки крючков, хорошо знают, что искать червей нужно в "жирной" земле, богатой перегноем ...