Определение активности карбоксипептидазы Н

50мкл 1% гомогената смешивали со 150мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6, в случае контрольной пробы; в случае опытной пробы 50мкл 1% гомогената смешивали со 140мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6 с добавлением 10мкл ГЭМЯК.

Смесь инкубировали 8 мин при 37°C. Реакцию начинали прибавлением 50мкл субстрата (DNS-фен-лей-арг, приготовленного на 50мМ натрий-ацетатном буфере при рН 5.6). Пробы перемешивали и инкубировали 60 мин при 37°C.

Реакцию останавливали добавлением 50мкл 1н р-ра HCl.

Для экстракции продукта DNS-фен-лей к пробам добавляли 1,5 мл хлороформа, интенсивно встряхивали в течение 60с и центрифугировали 10мин при 1000об/мин для разделения фаз.

Измерение флюоресценции проводили на флюориметре ФМЦ-2 (λex = 360нм, λex = 530нм) в кювете толщиной 1см.

Активность КПН определяли как разность в флюоресценции проб и выражали DNS-фен-лей, образовавшегося за 1мин инкубации в расчете на 1мг белка.


Дыхание
Дыханием называют процесс газообмена между живым организмом и окружающей средой. При этом из внешней среды организм потребляет кислород, а выделяет наружу углекислый газ. Кислород необходим живой клетке для непрерывно идущего в ней процесса окисления, освобождающего энергию. Углекислый газ образуется в результате окисления, как конечный ...

Антарктида
Антарктида – материк в центре Антарктики. Площадь = 13975 тысяч квадратных километров. Наиболее суровая область Земли с низкими температурами воздуха, сильными ветрами, снежными буранами и туманами. Свыше 99% тeppитopии покрыто льдами толщиной до 1720 метров. Наибольшая толщина льда - 4300 метров. В восточной Антарктиде - полюс холода, ...

Загрязнение атмосферы
Загрязнение воздуха не признает государственных границ, а ветер не нуждается в паспорте. Загрязнение воздуха происходит различными веществами, но наибольший вред приносят следующие четыре вещества: 1) Двуокись серы. Одна из причин поступления ее в атмосферу - сжигание топлива на тепловых электростанциях. 2) Оксиды азота, содержащиеся ...