Определение активности карбоксипептидазы Н

50мкл 1% гомогената смешивали со 150мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6, в случае контрольной пробы; в случае опытной пробы 50мкл 1% гомогената смешивали со 140мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6 с добавлением 10мкл ГЭМЯК.

Смесь инкубировали 8 мин при 37°C. Реакцию начинали прибавлением 50мкл субстрата (DNS-фен-лей-арг, приготовленного на 50мМ натрий-ацетатном буфере при рН 5.6). Пробы перемешивали и инкубировали 60 мин при 37°C.

Реакцию останавливали добавлением 50мкл 1н р-ра HCl.

Для экстракции продукта DNS-фен-лей к пробам добавляли 1,5 мл хлороформа, интенсивно встряхивали в течение 60с и центрифугировали 10мин при 1000об/мин для разделения фаз.

Измерение флюоресценции проводили на флюориметре ФМЦ-2 (λex = 360нм, λex = 530нм) в кювете толщиной 1см.

Активность КПН определяли как разность в флюоресценции проб и выражали DNS-фен-лей, образовавшегося за 1мин инкубации в расчете на 1мг белка.


Гипотеза тепловой смерти Вселенной
Этот принцип, распространенный на крупномасштабные процессы, протекающие во Вселенной, привел к гипотезе о тепловой смерти Вселенной. Если все физические процессы протекают в направлении передачи тепла от более горячих тел к менее горячим, это означает что во Вселенной идет выравнивание температуры, что означает тепловую смерть Вселенно ...

Донаучный этап химии — ремесленная химия и алхимия античности и средневековья
В предыдущем пункте было рассказано о том, как происходила естественная химическая эволюция в недрах звезд, космическом пространстве и на нашей планете, теперь надо рассмотреть, как происходила эволюция взглядов людей на познание сущности химических элементов и превращения вещества. Так же, как и в познании физического устройства мира, ...

Экономическая и энергетическая эффективность применения удобрений. Энергетическая эффективность применения удобрений
Эффективность применения удобрений в севообороте можно рассчитать по содержанию в сельскохозяйственной продукции энергии. Энергия накопленная в сельскохозяйственной продукции вычисляется по формуле: где Vfo – содержание энергии в прибавке урожая, МДж/га; Yn – прибавка урожая основной продукции от удобрений, т/га; Ri – коэффициент п ...