Определение активности карбоксипептидазы Н
50мкл 1% гомогената смешивали со 150мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6, в случае контрольной пробы; в случае опытной пробы 50мкл 1% гомогената смешивали со 140мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6 с добавлением 10мкл ГЭМЯК.
Смесь инкубировали 8 мин при 37°C. Реакцию начинали прибавлением 50мкл субстрата (DNS-фен-лей-арг, приготовленного на 50мМ натрий-ацетатном буфере при рН 5.6). Пробы перемешивали и инкубировали 60 мин при 37°C.
Реакцию останавливали добавлением 50мкл 1н р-ра HCl.
Для экстракции продукта DNS-фен-лей к пробам добавляли 1,5 мл хлороформа, интенсивно встряхивали в течение 60с и центрифугировали 10мин при 1000об/мин для разделения фаз.
Измерение флюоресценции проводили на флюориметре ФМЦ-2 (λex = 360нм, λex = 530нм) в кювете толщиной 1см.
Активность КПН определяли как разность в флюоресценции проб и выражали DNS-фен-лей, образовавшегося за 1мин инкубации в расчете на 1мг белка.
Структура хроматина. Полиморфизм ДНК
В живых организмах молекулы ДНК представляют собой либо очень длинные, либо замкнутые в кольцо двуспиральные молекулы, поэтому любой процесс, связанный с передачей наследственной информации, должен наталкиваться на серьезные топологические проблемы: возникновение положительной (+) или отрицательной (-) сверхспирализации ДНК, образование ...
Киты, и не только.
Дельфины - это два семейства зубатых китов. Представители семейства океанических дельфинов (или просто дельфиновых) всем известны, но кроме них есть еще и семейство пресноводных дельфинов. Четыре вида этого семейства водятся в реках и озерах Азии и Южной Америки.
Пресноводные или речные дельфины - самые примитивные представители отряда ...
Меры предотвращения зимних повреждений
Гибель происходит тогда, когда острые грани кристаллов льда рвут клеточные мембраны, из-за чего содержимое клетки перемешивается и она теряет способность к сколько-нибудь нормальному метаболизму. Поэтому очень важно для растений связать воду клеточного сока, ограничив ее возможность к образованию льда и одновременно снизив температуру з ...