Определение активности карбоксипептидазы Н

50мкл 1% гомогената смешивали со 150мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6, в случае контрольной пробы; в случае опытной пробы 50мкл 1% гомогената смешивали со 140мкл 50мМ натрий-ацетатного буфера, рН 5.6 с добавлением 10мкл ГЭМЯК.

Смесь инкубировали 8 мин при 37°C. Реакцию начинали прибавлением 50мкл субстрата (DNS-фен-лей-арг, приготовленного на 50мМ натрий-ацетатном буфере при рН 5.6). Пробы перемешивали и инкубировали 60 мин при 37°C.

Реакцию останавливали добавлением 50мкл 1н р-ра HCl.

Для экстракции продукта DNS-фен-лей к пробам добавляли 1,5 мл хлороформа, интенсивно встряхивали в течение 60с и центрифугировали 10мин при 1000об/мин для разделения фаз.

Измерение флюоресценции проводили на флюориметре ФМЦ-2 (λex = 360нм, λex = 530нм) в кювете толщиной 1см.

Активность КПН определяли как разность в флюоресценции проб и выражали DNS-фен-лей, образовавшегося за 1мин инкубации в расчете на 1мг белка.


Ионное равновесие
Как создаются и поддерживаются ионные градиенты и соответствующий электрический потенциал? На рис.1.1 показано, что ионы находятся в положении обратной пропорциональности: ионы калия более концентрированы внутри клетки, а ионы хлора снаружи. Представим себе, что мембрана клетки проницаема только для ионов калия. Возникает вопрос, почему ...

Время
культиви- рования, сутки Время внесения добавок ЭДТА Контроль (до посева) (вариант 1) 4сутки (вариант 2) 4, 6 сутки (вариант 3) ЭДТА, г/л Биомасса, г/л ЭДТА, г/л Биомасса, г/л ЭДТА, г/л Биомасса, г/л 0 0,94 0,010 0,94 0,010 0,94 0,010 1 0,78 0,016 0,78 0 ...

Схема эксперимента
Самки Самцы Определение стадии эстрального цикла Диэструс Проэструс Эструс норма контроль этанол норма контроль Этанол норма контроль Этанол норма контроль этанол 1г/кг 4г/кг 1г/кг 4г/кг 1г/кг 4г/кг 1г/кг 4г/кг Забой животн ...