Молекулярная характеристика гена CAL (арабидопсис)
Ген арабидопсиса CAULIFLOWER очень похож на ген API, что и было использовано для его клонирования. Как и API, ген CAL тоже кодирует белок с доменом MADS, и, следовательно, тоже может являться активатором транскрипции. Последовательности белков Cal и Apl имеют гомологию 70 %. Внутри домена MADS они различаются только пятью аминокислотными остатками из 56, т. е. оба белка, вероятно, узнают похожие последовательности ДНК и участвуют в регуляции сходных генов. Таким образом, функциональная вырожденность этих генов, обнаруживаемая в генетических исследованиях, подтверждается их структурным сходством. Однако, хотя данные молекулярного анализа хорошо согласуются с фактом функциональной вырожденности генов CAL и API, они не дают ответа на вопрос, почему CAL может только частично заменять API.
Ген CAL начинает экспрессироваться в примордиях цветков одновременно с геном API, и затем тоже обнаруживается только в примордиях двух наружных мутовок органов. В отличие от API, РНК которого накапливается в больших количествах в процессе развития лепестков и чашелистиков, РНК CAL в примордиях этих органов обнаруживается лишь в небольших количествах. Возможно, именно поэтому CAL неспособен заменить API при формировании лепестков и чашелистиков. Какова же роль гена CAL в развитии цветка? Данные молекулярного анализа свидетельствуют о том, что в двойных мутантах apl cal концентрация РНК LFY очень сильно редуцирована, в то время как в мутантах apl она не отличается от таковой для дикого типа. Таким образом, функция CAL может заключаться в поддержании активности гена LFY. Вероятно, поэтому и фенотип тройных мутантов Ну apl cal не отличается от фенотипа двойных мутантов Ify apl: если ген LFY инактивирован, ген CAL уже неспособен влиять на его активность.
Соцветия цветной капусты Brassica oleracea var. botrytis и капусты-брокколи Brassica oleracea var. italica представляют собой одну из аномалий развития цветка. Как и многие другие разновидности используемой для еды капусты - такие, как капуста белокочанная и краснокочанная, брюссельская, листовая, - обе эти разновидности тоже произошли от Brassica oleracea дикого типа. Как известно, Brassica и арабидопсис относятся к одному семейству - крестоцветных, и их соцветия дикого типа и фенотипа cauliflower морфологически очень похожи. При исследовании двух достаточно отдаленных видов растений, арабидопсиса и львиного зева оказалось, что механизмы, контролирующие развитие цветка, у них довольно консервативны. Гомологи почти всех клонированных генов есть у обоих видов, и типы их экспрессии очень похожи. Следовательно, не должно быть сюрпризом то, что молекулярная основа фенотипа cauliflower у арабидопсиса и близкородственной Brassica oleracea var. botrytis могут быть идентичны. Чтобы проверить, так ли это на самом деле, были клонированы гомологи гена CAL - bobCAL из цветной капусты, boiCAL из брокколи и boCAL из Brassica oleracea дикого типа. Как оказалось, открытая рамка считывания гена bobCAL прерывается стоп-кодоном в пятом экзоне, и соответствующий мутантный белок имеет молекулярный вес 17 кДа вместо белка дикого типа с молекулярным весом 30 кДа. В гене boiCAL не обнаружили подобный стоп-кодон, однако, в нем имеется делеция кодонов пяти аминокислотных остатков, а также аминокислотные замены в двух из трех кодонах, которые изменены у мутанта арабидопсиса cal-1. Таким образом, эти данные свидетельствуют в пользу того, что фенотипы соцветий цветной капусты и брокколи по крайней мере частично обусловлены мутациями в гене CAL.
Центрифугирование в сахарозном градиенте
Центрифугирование в градиенте сахарозы является наиболее простым, но в тоже время менее чувствительным методом анализа РНК-белковых комплексов, основным достоинством которого являются значительно большие возможности при выборе ионных условий, чем, например, при использовании электрофоретических методов. При применении возможно формирова ...
Стратегии изучения коры
Каким образом сигналы, определяющие маленькие, яркие, темные или цветовые пятна на сетчатке могут быть преобразованы в сигналы, которые несут информацию о форме, размере, цвете, движении и глубине расположения объектов. Методики, считающиеся сейчас рутинными, такие как оптическая регистрация, введение пероксидазы хрена или сканирование ...
Специфичность патогенеза инфекций
Специфическая и дифференцированная реакция организма на различные микроорганизмы, позволяющая отличить одно заболевание от другого, составляет сущность проблемы специфичности патогенеза инфекций. Последняя определяется специфичностью патогенного действия микроорганизма или его продуктов метаболизма и распада и соответствующей реакцией м ...