Постановка ПЦР в микрообъеме с отрицательными контролями
ПЦР ставили по протоколам с использованием SYBRgreen и TaqMan. Общий объем ПЦР смеси составлял 1 мкл. Количество внесенной матрицы одинаково – 7 нг. Контролем служили пробы без матрицы. Измерение и регистрацию флуоресцентного сигнала проводили с помощью описанной системы детекции и программы «Qwantа». Результаты измерений представлены в таблице 5.
По данным таблицы видно, что приращение сигнала флуоресценции сопоставимо с измерениями, полученными при проведении ПЦР в капле смеси объемом 1 мкл в среде масла в обоих случаях. А значит амплификация проходит с не меньшей эффективностью чем на моделях с каплями. Сильный разброс значений в случае SYBRgreen лишний раз доказывает, что работа с микрообъемами – это очень сложный процесс, где даже самые минимальные погрешности в работе (погрешности пипеток, чистота преперата и т.д.) становятся критичными и влияют на результат.
Таблица 5.
|
SYBRgreen | |||||||||
|
С матрицей (флуоресценция, у.е.) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Без матрицы (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Приращение (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение(среднее отклонение) | ||||
|
41 |
40,8(3) |
34 |
35,4(4) |
7 |
5,4(3,5) | ||||
|
40 |
31 |
9 | |||||||
|
38 |
36 |
2 | |||||||
|
44 |
39 |
5 | |||||||
|
41 |
37 |
4 | |||||||
|
TaqMan | |||||||||
|
С матрицей (флуоресценция, у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Без матрицы (флуоресценция,у.е) |
Среднее значение (среднее отклонение) |
Приращение (флуоресценция,у.е) |
Среднее значение(среднее отклонение) | ||||
|
82 |
89,2(8,5) |
57 |
58,2(1,5) |
25 |
31(19) | ||||
|
99 |
55 |
44 | |||||||
|
91 |
60 |
31 | |||||||
|
89 |
60 |
29 | |||||||
|
85 |
59 |
26 | |||||||
Выводы:
1. Получен и обработан набор дифракционных данных для комплекса S15-16SрРНК (S15 T3C мутант).
2. Методом молекулярного замещения определена структура комплекса.
3. Показано, что рибосомный белок комплекса S15 связывается с 16S рРНК в двух пространственно удалённых участках.
4. Показано, что мутация Т3С не изменяет пространственной ст ...
Энергия и питательные
вещества
Животные нуждаются в пище, в результате переваривания которой они получают определенные специфические питательные вещества и витамины для роста и восстановления тканей, а также для борьбы с паразитами и болезнетворными организмами.
Клетки тела получают энергию главным образом в форме глюкозы, растворенной во внеклеточной жидкости. В пр ...
Важнейшие химические связи и методы исследования
веществ
Как известно, атомы могут соединяться друг с другом с образованием как простых, так и сложных веществ. При этом образуются различного типа химические связи: ионная, ковалентная (неполярная и полярная), металлическая и водородная. Одно из наиболее существенных свойств атомов элементов, определяющих, какая связь образуется между ними – ио ...